斑替枝孢生物學(xué)特性及致病性初步研究

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1、斑替枝孢生物學(xué)特性及致病性初步研究斑替枝孢生物學(xué)特性及致病性初步研究加州鱸魚（Micropterussalmonides）原名大口黑鱸，分類學(xué)上屬鱸形目（Perciformes），太陽魚科[1]，身體長而側(cè)扁，稍紡錘形，橫截面為橢圓形。全身覆蓋銀白色或淡黃色細(xì)密鱗片，但脊柱顏色較深，通常呈綠青色或淡黑色，同時(shí)沿側(cè)線附近常有黑色斑紋。腹部呈灰白色。背肉稍厚，墨綠色，體側(cè)青綠。生活在淡水湖泊，原產(chǎn)自美洲，1983年引進(jìn)中國進(jìn)行養(yǎng)殖，通過人工馴化后，性格較溫和，不喜歡跳躍，容易受到驚嚇。加州鱸魚通?？梢栽?%以下的咸淡水域中正常生長，水質(zhì)要求每升水溶氧量在1.5mg以上，比鱸魚、鱖

2、魚耐低氧能力強(qiáng)[2]。鱸魚肉是高蛋白食物，維生素A和維生素B豐富，滋補(bǔ)肝腎，健脾和胃，而且對(duì)感冒止咳有很好的功效，能化痰止咳，含有豐富的微量元素鈣、鎂、鋅、硒等。加州鱸魚生長迅速，肉質(zhì)鮮美，容易養(yǎng)殖，且經(jīng)濟(jì)效益高，是中國常見的淡水養(yǎng)殖品種。草魚（Ctenopharyngodonidellus）屬鯉形目鯉科，是中國重要的淡水養(yǎng)殖魚類，它和鰱、鳙、青魚一起，構(gòu)成了中國著名的四大家魚[3]。　　本研究所用菌株是從患病加州鱸魚體表分離，通過分子鑒定和形態(tài)鑒定，初步鑒定為斑替枝孢（Cladosporiumbantianum），屬真菌門（Fung）半知菌亞門（Deuteromycota）

3、絲孢綱（Hyphomycetes）叢梗孢目（Miniliales）暗色孢科（Dematiaceae）枝孢屬（Cladosporium）。能引起皮膚暗色絲孢霉病[4]，尤其侵染腦部引起腦囊腫或膿腫，少數(shù)為腦膜炎[5]。在PDA和PCA培養(yǎng)基上生長迅本文由.L.收集整理速，菌落扁平。鼠灰色絨毛狀，中央高凸，呈紐扣狀，表面有不規(guī)則皺褶，37℃生長良好。在Sabourand培養(yǎng)基上，菌落稍大，灰棕色絨毛狀，背面黑色。菌絲灰棕色，分生孢子橢圓形、梨形、鏈生[6]?！　檠芯堪咛嬷︽叩纳飳W(xué)特性和對(duì)其他淡水魚類的致病性，本試驗(yàn)通過不同pH和不同溫度條件對(duì)該真菌的生長狀況和菌落大小的影響，

4、研究該真菌的生物學(xué)特性。同時(shí)將該真菌回復(fù)感染草魚和鯉魚，觀察真菌對(duì)草魚和鯉魚是否具有致病性，為淡水魚類的中草藥防治提供一定的理論依據(jù)。1材料與方法　　1.1材料　　該菌株分離自患病加州鱸魚體表潰爛處，在PDA培養(yǎng)基上純培養(yǎng)，將獲得的純培養(yǎng)菌株保存于5℃冰箱備用。菌株的分離與鑒定見魏福倫等[6]的報(bào)道。　　1.2方法　　1.2.1不同pH對(duì)斑替枝孢的影響將該真菌接種在pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0的PDA培養(yǎng)基上，在25℃下恒溫培養(yǎng)，觀察真菌菌株的生長狀況，每隔24h觀察一次，采用十字交叉法測(cè)定真菌菌落直徑并記錄下來。每個(gè)梯度做3個(gè)平板，試驗(yàn)周

5、期為15d?！　?.2.2不同溫度對(duì)斑替枝孢的影響將該真菌接種在PDA培養(yǎng)基上，在溫度為5、10、15、20、25、30、35、40℃下培養(yǎng)，觀察真菌菌株的生長狀況，測(cè)量其直徑記錄下來。每個(gè)梯度做3個(gè)平板，測(cè)量方法同上。試驗(yàn)周期為14d?！　?.2.3斑替枝孢的致病性用于回復(fù)感染的淡水魚是草魚和鯉魚，取自烏江網(wǎng)箱[7]。取回后置自然條件下培養(yǎng)，待魚在自然環(huán)境中生長狀況穩(wěn)定后進(jìn)行回復(fù)感染。每組10尾魚裝到養(yǎng)魚箱中，每次試驗(yàn)3箱魚，一箱為對(duì)照組，另兩箱為試驗(yàn)組。對(duì)照組將真菌菌株接種在魚胸鰭下，放進(jìn)魚箱中培養(yǎng)。試驗(yàn)組一箱魚直接刮入真菌菌株進(jìn)行培養(yǎng)，另一箱魚在魚胸鰭下接種真菌菌株。每

6、24h觀察一次，觀察該菌對(duì)淡水魚是否具有致病性。記錄每天的觀察結(jié)果，試驗(yàn)周期為20d。　　1.2.4數(shù)據(jù)分析用SPSS_Statistics-v19.0m）。pH9.0時(shí)，真菌生長速度最快，菌落直徑達(dá)52.3mm，菌落最為致密，pH7.0、8.0時(shí)，真菌生長速度也相對(duì)較快，菌落直徑分別達(dá)51.3、52.0mm，因此最適生長的pH為9.0?！　?.2不同溫度對(duì)斑替枝孢的影響　　真菌的生長狀況在不同溫度下有明顯的差異，在溫度低于5℃和高于35℃時(shí)，均不能生長（接種菌直徑為2mm）。在10～30℃范圍內(nèi)，該菌的生長速度隨溫度的升高而增快，在20℃時(shí)生長速度相對(duì)較快，菌落直徑達(dá)61.

7、7mm，菌落最為致密。25℃時(shí)，真菌生長速度也相對(duì)較快，菌落大小為58.7mm，但菌落不如20℃時(shí)致密。因此20℃為斑替枝孢的最適生長溫度。用SPSS軟件計(jì)算t值和Sig.（雙側(cè)）值，t值各不相同，Sig.（雙側(cè)）值均小于顯著水平0.05，與t檢驗(yàn)的零假設(shè)不相符，存在顯著性差異（表2、圖2）?！　?.3斑替枝孢的致病性　　將真菌菌株接種于草魚和鯉魚，培養(yǎng)后觀察，發(fā)現(xiàn)此菌株對(duì)草魚和鯉魚的生長沒有明顯的影響，沒有引起淡水魚患病或死亡。在魚體的傷口周圍取材進(jìn)行再培養(yǎng)，沒有發(fā)現(xiàn)埃里格孢，初步判斷斑替枝孢不感染草