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《山慈姑體外抑菌活性的初步研究論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、山慈姑體外抑菌活性的初步研究論文郭東貴王寒朱曉鶴周英【摘要】目的探討山慈姑的體外抑菌活性。方法將山慈姑提取物經(jīng)大孔樹脂（D-101）分離得到4個組分A，B，C和D，用倍比稀釋法測定其抑菌活性。結(jié)果金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）對組分D有很強的敏感性，MIC≤12.5mg/ml，對組分B有中等強度的敏感性，MIC為12.5～25mg/ml；白色念珠菌（Candidaalbicans，ATCC-10231）對組分B和組分D有中等強度的敏感性.freelg/ml，大腸桿菌（Escherichiacoli）對各組分的敏感性都較低，MIC
2、＞50mg/ml。結(jié)論山慈姑提取物B和D對金黃色葡萄球菌和白色念珠菌具有較強的抑菌效果。【關(guān)鍵詞】山慈姑體外抑菌倍比稀釋法最低抑菌濃度山慈姑為蘭科植物杜鵑蘭Cremastraappendiculata(D.Don)Makino，獨蒜蘭Pleionebulbocodioides(Franch.)Rolfe或云南獨蒜蘭Pleioneyun-nanensisRolfe的干燥假鱗莖，前者習(xí)稱“毛慈姑”，后二者習(xí)稱“冰球子”［1］，主產(chǎn)于貴州、四川、云南等長江以南各省區(qū)。作為傳統(tǒng)的中藥材，山慈姑始載于唐《本草拾遺》，具有清熱解毒、消腫散結(jié)的功效。本文旨在探討山慈姑的
3、體外抑菌作用，為進一步開發(fā)利用山慈姑奠定基礎(chǔ)。1材料與儀器1.1材料山慈姑由貴州信邦中藥發(fā)展有限公司GAP種植基地提供。大孔樹脂（D-101，天津化學(xué)試劑公司）。1.2試劑氯仿（AR，四川鴻鶴精細(xì)化工有限責(zé)任公司），醋酸乙酯（AR，四川鴻鶴精細(xì)化工有限責(zé)任公司），95％乙醇（AR，重慶川江化學(xué)試劑廠），蒸餾水（自制），無菌水（自制）等。1.3菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、大腸桿菌（Escherichiacoli）由中國微生物菌種保藏中心提供，白色念珠菌（Candidaalbicans）由廣東省微生物研究所微生物菌種保藏中心
4、提供。1.4培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂15g，定容至1000ml，pH值調(diào)至7.0；沙氏固體培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，瓊脂15g，定容至1000ml，pH調(diào)節(jié)5.0。液體培養(yǎng)基組成除了不加瓊脂外，與相應(yīng)的固體培養(yǎng)基相同。1.5儀器高低溫恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（BUCHIR-200），SHZ-D（III）循環(huán)水式真空泵（河南省鞏義市予華儀器有限公司），電子天平（OHAUS），凈化工作臺（上海市純昱科學(xué)儀器有限公司），真空冷凍干燥機（LABCONCO），超低溫冰箱(海爾)，
5、雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司TU-1901）。2方法2.1樣品的制備取粉碎后的山慈姑100g，用70%乙醇浸提3次，72h/次，合并提取液，減壓濃縮至適量，依次用氯仿、醋酸乙酯萃取后，取水層減壓濃縮，濃縮液用95%乙醇溶解，過濾，濾渣以蒸餾水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇為流動相，D-101為固定相得到四組分，分別減壓濃縮、冷凍干燥后得組分A（水洗脫物），B（25%乙醇洗脫物），C（50%乙醇洗脫物）和D（75%乙醇洗脫物）。2.2菌種培養(yǎng)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（組成成分見上）活化培養(yǎng)，白色念珠菌采用沙氏培養(yǎng)基
6、（組成成分見上）活化培養(yǎng)，分別將各菌種濃度調(diào)至OD600≈1［2］，備用。2.3最低抑菌濃度（MIC）的測定取A、B、C、D四組分各100mg溶于1ml無菌水中使其充分溶解后，用細(xì)菌過濾器過濾，取濾液0.3ml，用相應(yīng)的液體培養(yǎng)基倍比稀釋［3］成樣品濃度分別為50，25，12.5mg/ml和6.25mg/ml。取稀釋后的樣品各300μl，分別加入活化的菌懸液30μl（OD600≈1）后培養(yǎng)16h，培養(yǎng)溫度為：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為35℃，白色念珠菌為27℃。培養(yǎng)后分別取100μl均勻涂布在相應(yīng)的固體培養(yǎng)基上，在各自的溫度下恒溫培養(yǎng)24h，并以相應(yīng)溶劑作
7、對照，測定其最小抑菌濃度（MIC）［4］。3結(jié)果3.1實驗結(jié)果山慈姑不同組分對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌的MIC結(jié)果見表1。表1山慈姑不同組分的最低抑菌濃度（略）3.2分析目前國內(nèi)外尚無統(tǒng)一中草藥對細(xì)菌的MIC標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合本實驗結(jié)果，筆者參照同類實驗［5］的標(biāo)準(zhǔn)作為判斷指標(biāo)，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌對山慈姑各組分表現(xiàn)出不同的敏感性：金黃色葡萄球菌對組分A和C的敏感性較弱，MIC＞50mg/ml；對組分B有較強的敏感性，12.5mg/ml＜MIC≤25mg/ml；對組分D有很強的敏感性，MIC≤6.25mg/ml。大腸桿菌對山慈姑各組分的
8、敏感性都較弱，MIC＞50mg/ml。白色念珠菌對組分A和C的敏感
