右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠造血功能的影響

《右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠造血功能的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠造血功能的影響作者：鄭軼峰張力華秦劍石婭萍周毅【摘要】目的：觀察右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠外周血、造血干細(xì)胞增殖能力、骨髓細(xì)胞周期和凋亡的影響，并探討其可能作用機(jī)制。方法：小鼠48只，隨機(jī)分為正常組、模型組，右歸丸低、中、高劑量組和陽性對(duì)照組，每組8只。除正常組外，余五組均予造模，連續(xù)3天給予腹腔注射環(huán)磷酰胺制備骨髓抑制模型。造模后各組應(yīng)用相應(yīng)藥物治療7天。用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法、造血祖細(xì)胞培養(yǎng)和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分別檢測(cè)右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核細(xì)胞數(shù)、體外培養(yǎng)

2、各系造血祖細(xì)胞的集落數(shù)以及骨髓細(xì)胞周期和凋亡的影響。結(jié)果：右歸丸中、高劑量均能明顯升高外周血紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)、骨髓有核細(xì)胞(BMC)數(shù)，高劑量對(duì)血小板(PLT)和白細(xì)胞(期細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，提高G2/M期細(xì)胞比例，增殖指數(shù)(PI)明顯升高。右歸丸中、低劑量組的骨髓細(xì)胞凋亡比例顯著下降。結(jié)論：右歸丸可能通過促進(jìn)G0期造血干細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期，進(jìn)行增殖；加速骨髓細(xì)胞修復(fù)受損的DNA，通過G1/S和S期監(jiān)測(cè)點(diǎn)；抑制造血細(xì)胞的凋亡；調(diào)節(jié)造血細(xì)胞增殖與凋亡之間的平衡等機(jī)制，從而促進(jìn)損傷骨髓造血功能恢復(fù)

3、?！娟P(guān)鍵詞】小鼠骨髓抑制右歸丸細(xì)胞周期凋亡細(xì)胞培養(yǎng)右歸丸出自明代張景岳的《景岳全書》，由熟地、制附子、肉桂、山藥、山茱萸、菟絲子、枸杞、鹿角膠、杜仲、當(dāng)歸等藥組成，為溫補(bǔ)腎陽的代表方劑，具溫補(bǔ)腎陽、填精益髓之功效。本研究采用60Co伽馬射線和環(huán)磷酰胺(CTX)聯(lián)合制作骨髓抑制小鼠模型，觀察右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠外周血細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞數(shù)、造血干細(xì)胞增殖能力、骨髓細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響，為其在臨床上的進(jìn)一步應(yīng)用提供理論依據(jù)。1材料和方法1．1材料8～12周齡BALB／c純系雄性小鼠48只，體質(zhì)量18～2

4、2g(四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管字09號(hào))；右歸丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào)：8013042)，使用前用生理鹽水配制成相應(yīng)濃度的溶液；環(huán)磷酰胺（山西普德藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20080106)；重組人粒細(xì)胞集落刺激因子注射液(特爾津，廈門特寶生物工程股份有限公司，批號(hào)：200807820)；碘化丙啶(PI)熒光染液(美國(guó)Sigma公司)；60Coγ射線放射源(四川省腫瘤醫(yī)院放療科提供)；全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀BC3000Plus型(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司

5、)；流式細(xì)胞儀(EPICSXL型，BeckmanCoulter公司)。1.2方法1．2．1骨髓抑制動(dòng)物模型的制備參照嚴(yán)蘇純[1]等介紹的方法造模。小鼠經(jīng)2.0Gy的60Co照射后第4天開始，每天腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)50mg/kg(于臨用前配制)，連續(xù)給藥3天完成模型制備。1.2.2動(dòng)物分組與給藥將小鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，右歸丸低、中、高劑量組和陽性對(duì)照組，每組8只。除正常組外，其余五組均進(jìn)行造模。小鼠造模完成的第2天開始給藥，正常組和模型組每只灌胃0．2ml/（10g·d）的生理鹽水；右歸

6、丸低、中和高劑量組分別給右歸丸濃度為2.25g/kg、4.5g/kg和9.0g/kg，每只小鼠灌胃0.2ml／(10g·d)；陽性對(duì)照組每天腹腔注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)150μg/kg，共給藥7天。1.2.3外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)最后一次給藥后24小時(shí)，經(jīng)小鼠眼球后靜脈叢采血0．1ml，用BC3000Plus型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)。1.2.4骨髓有核細(xì)胞懸液的制備最后一次給藥后24小時(shí)，以頸椎脫臼法處死各組小鼠，取出股骨，剔除肌肉和結(jié)締組織，剪開股骨兩端，用6號(hào)針頭以生理鹽水液

7、沖出骨髓細(xì)胞，再用4號(hào)針頭過濾制成單個(gè)骨髓細(xì)胞懸液。取部分骨髓細(xì)胞懸液在顯微鏡下按白細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)。1.2.5造血祖細(xì)胞培養(yǎng)在最后一次給藥后24小時(shí)，頸椎脫臼處死各組小鼠，75％酒精浸泡消毒，無菌條件下取出股骨，參考　　2．3對(duì)骨髓抑制小鼠骨髓細(xì)胞周期和凋亡的影響與模型組比較，其余各組G0/G1期細(xì)胞比例均有不同程度降低，除中劑量組外，差異均有顯著性意義(P<0．05)。各組S期細(xì)胞比例高于正常組，除模型組和中劑量組外，其余各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；除右歸丸中劑量組外，各藥物組S期細(xì)胞

8、比例高于模型組(P<0．01)。各組G2／M期細(xì)胞比例均低于正常組(P<0．01)，各藥物組G2/M期細(xì)胞比例均高于模型組(P<0．01)。除中劑量組外，各藥物組增殖指數(shù)與模型組比較均有所提高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。與正常組比較，各組凋亡細(xì)胞比例明顯升高(P<0．01)；和模型組比較，各藥物組凋亡細(xì)胞比例均降低，除高劑量組外，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。表3右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠骨髓細(xì)胞周期和凋亡的影響　　3討論目前，對(duì)