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1、右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠骨髓細(xì)胞周期和凋亡的影響論文鄭軼峰，姜建青，張力華，石婭萍，黃茜【摘要】目的觀察右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠外周血、骨髓細(xì)胞周期和凋亡的影響,探討其可能造血調(diào)控作用機(jī)制。方法用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分別檢測(cè)右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核細(xì)胞數(shù)以及骨髓細(xì)胞周期和調(diào)亡的影響。結(jié)果右歸丸中、高劑量均能明顯升高外周血紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（Hb）、骨髓有核細(xì)胞(BMC)數(shù)，右歸丸高劑量對(duì)血小板(PLT)和白細(xì)胞(期細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,從而導(dǎo)致G2/M期細(xì)胞比例明顯升高
2、,增殖指數(shù)(PI)也明顯升高。中、低劑量組右歸丸的骨髓細(xì)胞凋亡比例顯著下降。結(jié)論右歸丸可能通過(guò)促進(jìn)骨髓細(xì)胞修復(fù)受損的DNA，加速通過(guò)G1/S和S期監(jiān)測(cè)點(diǎn)，進(jìn)行增殖和分化；抑制造血細(xì)胞的凋亡；調(diào)節(jié)造血細(xì)胞增殖與凋亡之間的平衡等機(jī)制.freelarroyelosuppressedmiceandtodiscussitspossiblemechanisminhematopoieticregulation.MethodsAutomaticbloodcellanalysator,etry(FCM)arroarroye
3、losuppressedmice.ResultsPeripheralredbloodcells,hemoglobinandbonemarroiddleorhighdoseYouGuiphase,thusledtoahighercellproportioninG2/MphaseasiddleorloarroaypromotetherecoveryofhemopoieticfunctionofinjuredbonemarroagedDNAanditcanaccelerateGO/G-SphaseandS-G2
4、/Mphasetransition,activatetheproliferationanddifferentiation,inhibittheapoptosisofhemopoieticcellsandregulatethebalancebetyelosuppressionbonemarroa公司產(chǎn)品)；60Coγ射線放射源(四川省腫瘤醫(yī)院放療科提供)；全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀BC-3000Plus型（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；流式細(xì)胞儀(EPICSXL型,Beckman-Coulter公司)。1.2
5、方法1.2.1骨髓抑制動(dòng)物模型的制備參照嚴(yán)蘇純等(4)的方法造模。小鼠經(jīng)2.0Gy60Co照射后的第4d開(kāi)始，每天腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)50mg/kg(于臨用前配制)，連續(xù)給藥3d完成模型制備。1.2.2動(dòng)物分組與給藥將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、右歸丸低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組8只。除正常對(duì)照組外,其它5組均進(jìn)行造模。小鼠造模完成的第2d開(kāi)始給藥,正常對(duì)照組和模型組每只灌胃0.2ml/10g/d的生理鹽水；低劑量、中劑量和高劑量右歸丸組分別給右歸丸2.25g/kg、4.5g/
6、kg和9.0g/kg,每只小鼠灌胃0.2ml/10g/d,陽(yáng)性對(duì)照組每日腹腔注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（G－CSF）150ug/kg，共給藥7d。1.2.3外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)最后一次給藥后24h，經(jīng)小鼠眼球后靜脈叢采血0.1ml，用BC-3000Plus型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)。1.2.4骨髓有核細(xì)胞懸液的制備最后一次給藥后24h,以頸椎脫臼法處死各組小鼠,取出股骨,剔除肌肉和結(jié)締組織,剪開(kāi)股骨兩端,用6號(hào)針頭以生理鹽水液沖出骨髓細(xì)胞,再用4號(hào)針頭過(guò)濾制成單個(gè)骨髓細(xì)胞懸液。取部分骨髓細(xì)胞懸液在顯微
7、鏡下按白細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)。1.2.5細(xì)胞周期樣品制備將上述單個(gè)骨髓細(xì)胞懸液離心(1000r/min,5min)，棄上清，用PBS洗滌兩次，去上清液，滴入70%冷乙醇固定細(xì)胞，立即混勻，用封口膜封口，放置4℃冰箱冷藏備用。1.2.6細(xì)胞周期分析和凋亡細(xì)胞測(cè)定取上述70%冷乙醇固定的細(xì)胞樣品,用PBS洗兩次,以洗去殘留的乙醇,加100μlPBS后混勻,加碘化丙錠染液1ml染色30分鐘(4℃,避光30min),上流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化和凋亡細(xì)胞的比例。結(jié)果以細(xì)胞周期各時(shí)相細(xì)胞百分率表示，并按
8、公式:PI=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100%計(jì)算細(xì)胞增殖指數(shù)(proliferationindex,PI)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用表示，各組數(shù)據(jù)先行方差齊性檢驗(yàn)，再進(jìn)行單因素方差分析，α=0.05。2結(jié)果2.1右歸丸對(duì)骨髓抑制小鼠外周血及骨髓有核細(xì)胞的影響由表1可見(jiàn)：與正常組相比，模型組白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、骨髓有核細(xì)胞均明顯降低(P0.01)。與模型組相比教，右歸丸中、高劑量的紅細(xì)
