銅綠假單胞菌mexaboprm主動外排表型篩選和外排基因檢測

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1、銅綠假單胞菌MexABOprM主動外排表型篩選和外排基因檢測作者：曹敬榮沈定霞錢妙玲羅燕萍徐雅萍田芳【摘要】目的研究解放軍總醫(yī)院臨床分離的多重耐藥銅綠假單胞菌的主動外排系統(tǒng)，為指導(dǎo)臨床合理選擇抗生素提供依據(jù)。方法采用外排泵抑制劑(苯丙氨酸精氨酸β萘酰胺)與喹諾酮類抗生素，以微量肉湯稀釋法測定加與不加外排泵抑制劑時環(huán)丙沙星與左氧氟沙星的最低抑菌濃度(MIC)值，并計算MIC值的變化，根據(jù)加與不加外排泵抑制劑MIC值降低3個稀釋度及以上篩選主動外排表型陽性菌株；PCR擴(kuò)增外排表型陽性菌的耐藥基因oprM、mexB和mexR，并對3株菌進(jìn)行mexR

2、基因測序分析；RTPCR檢測oprM基因的mRNA水平，分析耐藥基因的表達(dá)情況。結(jié)果苯丙氨酸精氨酸β萘酰胺能極大的降低左氧氟沙星和環(huán)丙沙星的MIC值，70株多重耐藥銅綠假單胞菌中46株表型陽性(65.7%)，其中PCR檢測oprM、mexB和mexR基因同時陽性菌株42株(91.3%)，僅oprM基因陽性2株(4.3%)，oprM、mexB和mexR基因均陰性2株(4.3%)。RTPCR產(chǎn)物測定A值(A260/A280)與PAO1對照陽性菌株13株，以PAO1的oprM/rpoD的A值為對照陽性菌株4株，同時滿足A值(A260/A280)和

3、oprM/rpoD比值均高于PAO1的菌株3株。測序結(jié)果與GenBank中已知的mexR基因比對，其中2株同源性為100%，1株第434位核苷酸插入2bp(AT)。結(jié)論中國人民解放軍總醫(yī)院多重耐藥銅綠假單胞菌大多存在主動外排的耐藥機(jī)制，其耐藥與外排泵過度表達(dá)相關(guān)。【關(guān)鍵詞】銅綠假單胞菌主動外排外排泵抑制劑苯丙氨酸精氨酸β萘酰胺MexABOprMRTPCRDetectionofthephenotypeandgenesofactiveeffluxpumpABSTRACTObjectiveTostudytheactiveeffluxpumpsof

4、clinicalisolatesofmultidrugresistantPseudomonasaeruginosainPLAhospitalandofferthetheoreticalevidencestoclinicians.MethodsThemicrodilutionmethodof96inetheminimuminhibitoryconcentrations(MICs)oflevofloxacin,ciprofloxacinaloneandtheeffectofthepresenceofeffluxpumpinhibitor(PheArg

5、βnaphthylamide).BasedonthevarietyofMICtodecrease8foldinthepresenceofPAβNtochoosethepositivephenotypestrains.PCRps:oprM,mexBandmexRbasedonthephenotypicselection.DNAsequencingexRgenesfor3strains.RTPCRRNAandanalyzetheexpressionoftheresistancegenes.ResultsFortysixstrains70mul

6、tidrugresistantP.aeruginosa(65.7%),andtheyplatestoamplifyoprM,mexBandmexRgenes.Amongthem,42strainsexBandmexRsimultaneously(91.3%).Tplificationbyallprimerpairs(4.3%).TheresultsofA(A260/A280)andoprM/rpoDforRTPCRproductsshoultaneouslybasedonPAO1andDNAsequenceresultsshoologyand1s

7、trainhasa2bp(AT)insertionin434point(GenBankaccessionnumberU23763).ConclusionsMostmultidrugresistantstrainsofP.aeruginosahaveactiveeffluxpumpsinPLAhospital.TheresistantmechanismofP.aeruginosaisassociatedexRgene.KEYexABOprM;RTPCR銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)是醫(yī)院常見條件致病菌之一，臨床分

8、離株多重耐藥(Multidrugresistance，MDR)直接影響感染的治療，因而研究耐藥機(jī)制指導(dǎo)合理用藥是大家關(guān)注