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1、12實用預防醫(yī)學2011年1月第18卷第1期PracticalPreventiveMedicine,Jan.2011,Vol18,No.1文章編號:1006-3110(2011)01-0012-03【論著】多重PCR檢測銅綠假單胞菌耐藥基因1111212何露,曾凡勝,范珍明,郭勁霞,黃烈,杜兆豐,陸學東摘要:目的了解銅綠假單胞菌耐藥現(xiàn)狀。方法采用多重PCR方法檢測銅綠假單胞菌中的常見耐藥基因。結果39株銅綠假單胞菌耐藥基因TEM、AmpC、VIM陽性率分別為84.6%、76.9%、17.9%,O
2、XA基因擴增陰性。銅綠假單胞菌對替卡西林、妥布霉素、環(huán)丙沙星、頭孢他啶耐藥率均大于28.2%(11/39),耐藥率最高為慶大霉素59.0%,對多粘菌素E最敏感92.3%,本組菌株中有25.6%(10/39)表現(xiàn)為多重耐藥。結論研究表明,攜帶TEM、AmpC、VIM是導致本組銅綠假單胞菌耐藥的重要機制β,-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性及多重耐藥性均較嚴重。關鍵詞:銅綠假單胞菌;多重PCR;耐藥基因中圖分類號:R44615文獻標識碼:AAnalysisonResistanceGenesofAntibioti
3、csfromPseudomonasaeruginosabyMultiplexPCRHELu,ZENGFan-sheng,FANZhen-ming,etal.(YiyangMedicalCollege,Yiyang413000,Hunan,China)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheresistancesituationofPseudomonasaeruginosainShenzhen.MethodsThecommonantibioticresistancege
4、nesinPseudomonasaeruginosaweredetectedbymultiplexPCRandE-teststrips.Re2sultsTEMwasdetectedin39stains(84.6%).Amongthem,VIMwasfoundin17.9%(7stains)andAmpCin76.9%(30stains).Thesusceptibilityresultsofantibioticsshowedthattheresistantratesofticarcillin,to
5、bramycin,ciprofloxacin,andceftazidimewereallbeyond28%.Theresistantratetogentamicinwasthehighest(59.0%).Themoresensitiveantibioticwasamikacin.ConclusionsThestudyindicatedthatthesePseudomonasaeruginosacarriedgenesofTEM,AmpC,andVIM,whichwastheessentialr
6、esistancemechanismofPseudomonasaeruginosainlocalarea.MultidrugresistanceandBeta-lactamantibioticsareseverity.Keywords:Pseudomonasaeruginosa;MultiplexPCR;Resistancegenes銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa,Pa)是臨床常見的銅綠假單胞菌ATCC27853。條件致病菌之一,已經(jīng)出現(xiàn)一部分對亞胺培南和三代頭孢菌素1
7、13藥敏試驗采用ATBPSE-5藥敏試條進行10種藥物的多重耐藥Pa。為了解Pa的耐藥情況,遂對2009年10月-敏感性試驗。2010年9月深圳市第四人民醫(yī)院住院患者分離到的39株Pa,114多重PCR擴增參照Axygen試劑盒方法提取銅綠假單進行TEM、OXA、AmpC、VIM等相關耐藥基因檢測及藥敏試胞菌DNA,分析TEM、OXA、AmpC、VIM基因組保守區(qū),根據(jù)驗,現(xiàn)將結果報告如下。保守區(qū)基因序列利用Primer5.0軟件設計多重PCR引物(引物[1～3]序列見表1),多重PCR擴增方法
8、參照曾凡勝等的報道,采1材料與方法用10μl反應體系,PCR產(chǎn)物做1%瓊脂糖凝膠電泳,紫外凝膠111主要試劑與儀器PCRMasterMix試劑(Fermentas公成像儀分析并記錄結果。司)、耐藥基因引物(Invitrogen公司合成)、PCR儀(PTC-200,表1多重PCR引物序列及擴增片段長度美國)、DNA提取試劑盒和DNA凝膠純化試劑盒(均購自Axy2基因上游引物(5’-3’)下游引物(5’-3’)產(chǎn)物長度gen公司)、凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad公司)、藥敏紙片及MH平板(英國Oxio
