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《多重耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌耐藥基因研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、鼉目錄lItll11111IIUl＼1800064中文摘要??????????????????????????．．1英文摘要??????????????????????????．．4研究論文多重耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌耐藥基因研究前言?????????????????????????．．7日lJ舌?????????????????????????．．’7材料與方法??????????????????????．．7結果??????????????????????????．9附圖??????????????????????????“附表????
2、??????????????????????14討論????????????????????．．?????．16參考文獻????????????????????????24綜述鮑曼不動桿菌對臨床抗菌藥物耐藥機制??????????．29致謝?????????????????????????????39個人簡歷??????????????????????????40中文摘要多重耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌耐藥基因研究摘要目的：應用聚合酶鏈反應(PCR)方法檢測我院呼吸重癥監(jiān)護室分離到的多重耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌p．內酰胺酶基因和整合子耐消
3、毒劑基因qacEAl-sull存在狀況。采用多基因聚類分析方法進行多重耐藥菌株親緣性分析。方法：l標本來源收集我院呼吸重癥監(jiān)護室(RICU)自2008年6月至2009年12月間因慢性阻塞性肺疾病急性加重期，急性呼吸窘迫綜合癥，老年重癥肺炎，顱腦疾病繼發(fā)感染行有創(chuàng)機械通氣患者下呼吸道分離的銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌。2藥敏試驗采用K．B法鑒定分離的銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌對頭孢哌酮／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦、頭孢他啶、亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、環(huán)丙沙星、米諾環(huán)素、多粘菌素B9種抗菌藥物的敏感性。并根據(jù)美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)
4、2004年版要求進行抗菌藥物敏感性判斷。本研究中多重耐藥菌株的選取標準為對上述抗生素中3類或3類以上藥物耐藥。本研究中共收集到33株多重耐藥銅綠假單胞菌和16株多重耐藥鮑曼不動桿菌。3PCR擴增模板制備采用蛋白酶K消化法制備模板液，并將制備好的模板置于．20℃冰箱保存。4基因檢測應用聚合酶鏈反應法，共檢測多重耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌9種耐藥基因，包括p．內酰胺酶基因(blaTEM，blaSHV，blaPER，blaDHA，blaIMP，blaVIM，blaOXA．23，blaOXA．24)和整合子耐消毒劑基因(qacEA1．sull)。將聚
5、合酶鏈反應產物經2％瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)與陽性對照分子相當?shù)哪康臈l帶判為陽性，用凝膠成像系統(tǒng)觀察電泳結果并攝像保存。5核酸序列測定將整合子耐消毒劑基I丟lqacEA1-sullPCRIjN性擴增產物回收后送測序。測得序列與GenBank核酸庫已登錄的序列作比對。6菌株親緣性分析．采用多基因聚類分析法，以多重耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的耐藥基因為分子標志做檢測結果的樣本聚類分析。中文摘要結果：l抗菌藥物敏感性試驗結果33株多重耐藥銅綠假單胞菌對多粘菌素B100％敏感，其對阿米卡星和美羅培南耐藥率均為45．45％，對其余幾種抗生素的耐藥率較高，均
6、在50％以上。16株多重耐藥鮑曼不動桿菌對多粘菌素B100％敏感，其對頭孢哌酮／舒巴坦和米諾環(huán)素的耐藥率較低，分別為25．00％和31．25％。對其余幾種抗生素的耐藥率均達到50％以上。2耐藥基因檢測結果33株多重耐藥銅綠假單胞菌p．內酰胺酶基因檢測果：blaTEM陽性8株(24．24％)，blaVIM陽性6株(18．19％)，blaIMP陽性3株(9．09％)，blaSHV陽性2株(6．06％)，blaDHA陽性5株(15．15％)，blaOXA一23，blaOXA．24，blaPER均未檢出，整合子耐消毒劑基因檢測qacEA1-sull陽性2
7、8株(84．85％)。16株多重耐藥鮑曼不動桿菌B．內酰胺酶基因檢測果：blaOXA．23陽性5株(31．25％)，blaTEM陽性2株(12．5％)，blaDHA2株(12．5％)，blaOXA．24l株(6．25％)，blaPER1株(6．25％)，blaSHV，blalMP，blaVIM均未檢出。整合子耐消毒劑基因檢測qacEAl．sull陽性16株(100％)。3核酸序列測定整合子耐消毒劑基因qacEAl-sull測得序列經比對與美國核酸庫己登錄的序列均相同。4菌株親緣性分析以多重耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的耐藥基因為分子標志做檢測結
8、果的聚類分析。33株多重耐藥銅綠假單胞菌中l(wèi)，23，27為同一克隆株，同時攜帶耐藥基因blaVIM和qacEAl．sull；12，25，
