vegf 基因在胃癌中的表達(dá)及其意義

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1、VEGF基因在胃癌中的表達(dá)及其意義【摘要】目的：探討VEGF基因在胃癌組織中的表達(dá)及意義。方法：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)檢測48例胃癌組織及30例正常組織中VEGF基因的表達(dá)。結(jié)果：48例胃癌組織標(biāo)本中有29例表達(dá)VEGF基因，而30例正常組織均不表達(dá)VEGF基因，兩組比較差異有顯著性(P<0.05)。結(jié)論：VEGF基因在胃癌組織中有較高的表達(dá),對胃癌病人的免疫治療和預(yù)后有重要意義?！娟P(guān)鍵詞】VEGF基因；胃癌；逆轉(zhuǎn)錄PCR　　胃癌是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤之一，其惡性程度與各種癌基因、腫瘤抑制因子及幾種生長因

2、子及其受體異常有關(guān)［1~4］。血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgro以上的癌旁組織，共收集標(biāo)本48例，其中男性28例，女性20例；高中分化27例，低分化21例，20例可見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；年齡24～78歲，平均年齡61.7歲。所有患者術(shù)前未經(jīng)過化療或放療，病理類型為粘液腺癌、管狀腺癌、印戒細(xì)胞癌。Trizol購自invitrogen公司，cDNA合成試劑盒購自MBI公司?！　?2方法　　121RNA的提取Trizol法提取總RNA：組織塊（約100mg）置勻漿器，加Trizol（約2ml）冷凍勻漿，室溫孵育5m

3、in，加入氯仿（0.2ml氯仿/1mlTrizol）用力振蕩15秒，室溫孵育2~3min，4℃，12000rpm離心15min，取上清，加入異丙醇（0.5ml異丙醇/1mlTrizol），室溫孵育60min，4℃，12000rpm離心15min，棄上清，75%乙醇洗滌沉淀一次（至少1ml75%乙醇/1mlTrizol），4℃，7500rpm離心5min，棄上清，風(fēng)干沉淀，加DEPC處理水溶解RNA，-80℃保存?zhèn)溆??！　?22cDNA的合成反應(yīng)體積為20μL，反應(yīng)條件如下：MgCl25mmol/L，10×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液2μL,dNT

4、P1mmol/L,逆轉(zhuǎn)錄酶15U,核酸酶抑制劑0.5U，Oligo(dT)15引物0.5μg,模板RNA1ug，加無RNase水至終體積20μL。42℃反應(yīng)1h，99℃加熱5min，然后快速冷卻至4℃，以滅活逆轉(zhuǎn)錄酶,并防止逆轉(zhuǎn)錄酶與cDNA結(jié)合，逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA用作PCR反應(yīng)的模板?！　?23PCR引物合成VEGF引物及內(nèi)參照GAPDH引物。VEGF引物序列為：5'ATGGCAGAAGGAGGAGGG3’和5'CGAAACGCTGAGGGAGGCT3'，GAPDH的引物為：5’CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA

5、3’和5’ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA3’。　　124PCR擴(kuò)增兩對引物的反應(yīng)體系均為25μL,VEGF反應(yīng)體系包括cDNA產(chǎn)物2μL,MgCl21.5mmol/L,10×Buffer2.5μL，dNTP0.04mmol/L,引物濃度0.5μmol/L,Taq酶1U，加去離子水至終體積25μL，混勻后滴加無菌石蠟油覆蓋液面，瞬時離心后置PCR擴(kuò)增儀中擴(kuò)增擴(kuò)增條件為94℃預(yù)變性5min，然后94℃55sec,50℃55sec,72℃1min24sec，共35個循環(huán),最后72℃延伸5min。GAPDH反應(yīng)體系包

6、括：cDNA模板2μL，MgCl21.5mmol/L，10×Buffer2.5μL,dNTP0.2mmol/L，引物0.5umol/L，Taq酶1U；PCR擴(kuò)增條件為94℃1min,55℃1min,72℃1min24sec，共30個循環(huán),然后72℃延伸5min。取10μL擴(kuò)增產(chǎn)物于含溴化乙錠的1.5%瓊脂糖凝膠中電泳,80V,1h，紫外透射儀觀察結(jié)果，VEGF基因陽性擴(kuò)增條帶為420bp，內(nèi)參照基因GAPDH擴(kuò)增條帶為200bp?！　?3統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件處理,兩組比較采用χ2檢驗?！　?結(jié)果　　GAPDH作為內(nèi)參

7、照,在所有組織標(biāo)本中均有穩(wěn)定表達(dá),用以證實實驗結(jié)果的可靠性。48例胃癌組織標(biāo)本中有29例，30例相應(yīng)正常組織均不表達(dá)VEGF基因（圖1）,兩組比較P<0.05,差異有顯著性?！　?分子量標(biāo)準(zhǔn)；2、3癌組織；4癌旁組織　　圖1VEGF基因的RT-PCR檢測（略）　　本研究對VEGF基因表達(dá)與不表達(dá)的胃癌病人進(jìn)行了臨床資料分析,VEGF基因的表達(dá)與年齡、性別、大小、組織學(xué)類型無關(guān),但與腫瘤的浸潤深度、臨床分期及淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移具有顯著的相關(guān)性(P<0.05)，見表1?！　”?VEGF表達(dá)與胃癌臨床病理指數(shù)的關(guān)系（略）　　3討論　　

8、胃癌是我國高發(fā)惡性腫瘤之一，手術(shù)仍是主要的治療手段，然而對于術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移以及不能手術(shù)的晚期病人，手術(shù)以外的其它治療就顯得尤為必要?；熾m是一種重要的輔助治療方法,但出于腫瘤的耐藥性以及化療藥物的嚴(yán)重副作用，其應(yīng)用受到一