bim1基因在胃癌中的表達及其臨床意義

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1、Bim1基因在胃癌中的表達及其臨床意義：祁衛(wèi)東,陳鎖成,王勝,許文榮,許曉蒙,孫靖【摘要】目的：探討B(tài)im1基因在胃腺癌細胞株、胃癌組織和癌旁組織以及胃癌患者外周血中的表達水平及其與臨床病理特征的關系。方法:收集80例胃癌患者的癌組織和癌旁組織,培養(yǎng)胃腺癌細胞株(SGC7901,BGC823,AGS),采用RTPCR和實時PCR的方法檢測Bmi1基因的表達情況。另外同時收集Bim1基因陽性胃癌患者外周血標本以及健康體檢者外周血標本各20例,用淋巴細胞分離液(Ficoll)分離獲得單個核細胞,采用巢式PCR和實時PCR的方法檢測其Bmi1基因的表達情況。采用蛋白質(zhì)

2、印跡法驗證胃癌組織和對應的癌旁組織以及胃癌患者及健康體檢者血單個核細胞中Bim1蛋白的表達情況。結(jié)果:胃腺癌細胞株(SGC7901,BGC823,AGS)中Bim1均高表達;胃癌組織中Bim1表達(85%)明顯高于癌旁組織(30%)(P<0.05);胃癌患者外周血單個核細胞Bim1基因的陽性率為60%,顯著高于健康體檢者(P<0.05)。胃癌組織和癌旁組織中Bim1的蛋白水平存在差異,而在外周血中未見明顯差異。結(jié)論:Bim1基因在胃腺癌細胞株以及胃癌組織中高表達,胃癌患者外周血單個核細胞Bim1的陽性率高于健康體檢者,通過檢測Bim1基因可為胃癌

3、的臨床診斷及其靶向治療提供新途徑?！娟P鍵詞】Bim1基因;胃癌;RTPCR;實時PCR　　[Abstract]Objective:TodetecttheexpressionofBim1geneingastriccarcinoma,adjacentnoncanceroustissuesandtheperipheralbloodofthecorrespondinggastriccarcinomapatient,toexplorea.Methods:TheexpressionofBim1geneerasechainreaction(RTPCR)andrealtimePC

4、Ringastriccarcinoma,andadjacentnoncanceroustissuesfrom80patientsandthegastriccarcinomacellstrain(SGC7901,BGC823,AGS).Furthermore,etimetheexpressionofBim1geneintheperipheralbloodofboth20correspondinggastriccarcinomapatientsandhealthpeople.UsingrealtimePCRandnestedRTPCRdetectedtheexpress

5、ionofBim1geneintheperipheralblood.EM基礎培養(yǎng)基,37℃在5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每3天換液1次,每6～7天傳代1次,顯微鏡下觀察細胞生長狀況。收集1ml懸浮細胞離心5min(800×g),用PBS沖洗3次。加入1mlTrizol,吹打混勻,室溫消化15min,裝入1.5ml的不含RNA酶Eppendorff管中,-70℃保存?zhèn)溆??！　?.4組織單個細胞制備　　將100mg胃癌及癌旁組織置于無RNA酶的組織研磨器中的銅網(wǎng)上,加入1ml含0.1%DEPC的PBS,使用一次性塑料研棒將組織研磨成單個細胞,轉(zhuǎn)入1.5ml的不含RNA酶的Eppen

6、dorff管中,1000×g離心5min,棄上清,用1ml含0.1%DEPC的PBS洗兩遍,離心,加入1mlTrizol,吹打混勻,室溫消化20min,裝入1.5ml的不含RNA酶的Eppendorff管中,用作RNA提取;-70℃保存?zhèn)溆??！　?.5總RNA提取　　用Trizol試劑提取胃癌及癌旁組織的總RNA,每份加入200μl冰冷的氯仿,反應10min,4℃12000×g離心10min,吸取上清液至另一1.5ml不含RNA酶的Eppendorff管中,加入600μl冰冷的異丙醇,室溫反應10min,4℃12000×g離心10min,棄上清,加入0.1%DEPC水處理過的7

7、5%乙醇洗滌,4℃12000×g離心5min,重復1次,棄上清,將沉淀置無菌超凈臺中干燥約30min至半透明,加入30μlDEPC處理過的雙蒸水,混勻,4℃靜置30min,使用核酸蛋白檢測儀檢測樣品濃度。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒以Oligo(dT)為引物合成cDNA第一鏈,-20℃保存。　　1.6引物設計　　引物參照基因庫中提供的Bim1mRNA的完整序列跨外顯子設計Bim1mRNA序列和內(nèi)參基因GAPDHmRNA序列。Bim1基因RTPCR和實時PCR使用Bim1內(nèi)側(cè)引物,巢式RTPC