hplc法分析貫葉連翹不同部位中金絲桃素的含量

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1、HPLC法分析貫葉連翹不同部位中金絲桃素的含量摘要用HPLC法測定貫葉連翹根、莖、葉、花、果中金絲桃素的含量；結果表明花中含量最高，莖中含量甚微。關鍵詞：貫葉連翹；金絲桃素；不同部位；HPLC　　貫葉連翹HypericumperforatumL.為藤黃科金絲桃屬植物，藥理實驗證明其主要成分金絲桃素具有抗病毒、抗炎及抗腫瘤作用，對人體激活白細胞的免疫功能有抑制作用〔1〕。目前以金絲桃素含量為貫葉連翹定量指標。我們建立了HPLC法，并測定了幾個產(chǎn)區(qū)的貫葉連翹原植物根、莖、葉、花、果中金絲桃素的含量，以指

2、導藥材的采收和金絲桃素生產(chǎn)原料的質(zhì)量控制。1　儀器與試藥1.1　儀器　HPLC儀(美國Perkin-Elmer公司)；LC-295型紫外可見檢測器；Series200泵；Plus-1022色譜工作站。1.2　試藥　乙腈(色譜純)；金絲桃素對照品(Sigma公司，批號97071503)；貫葉連翹(Hypericum.PerforatumLinn)全草(7月下旬至9月上旬采集)。2　方法與結果2.1　色譜條件　色譜柱：Nova-PakODS(4.6mm×200mm)；流動相：甲醇∶乙腈∶0.1mol/

3、L磷酸二氫鈉緩沖液(400∶100∶100)；流速：1ml/min；檢測波長：588nm；Range：0.05AUFS；進樣量：10μl，金絲桃素保留時間11min。2.2　供試液的制備　將原藥材各部位樣品分別粉碎，使全部過60目篩。精密稱取約1g，用甲醇-吡啶(90∶10)20ml超聲提取1h，放冷至室溫，最后定容于25ml量瓶中，用0.45μm濾膜濾過，濾液即為供試液。精密稱取金絲桃素對照品，用吡啶-甲醇(1∶9)溶解并稀釋為0.01mg/ml的溶液，作為對照品溶液。2.3　提取溶媒的選擇　金絲

4、桃素為多酚羥基雙蒽酮類，在甲醇中加入一定吡啶使提取溶劑呈弱堿性，有利于金絲桃素的溶出。2.4　提取時間　對同一藥材樣品分別加入吡啶-甲醇溶液20ml超聲提取15，30，45，60，90min后測定，表明45min以后金絲桃素的含量測定結果趨于穩(wěn)定(15%)，考慮超聲時間過長溶劑升溫，故采取超聲1h為宜。2.5　標準曲線的制備　分別吸取0，2.5，5，10，15，20μl的金絲桃素對照品溶液進樣，以峰面積對進樣量回歸得方程：y＝38707x－8804，r＝0.9991。　　同法取供試品溶液測定。結果見

5、表1。取同一藥材測定9次，RSD＝3.30%。表1　不同產(chǎn)地貫葉連翹各部位的含量產(chǎn)　地花葉莖根果實全草甘肅文縣0.0720.0460.002未檢出0.028甘肅康縣0.0900.035未檢出未檢出0.039湖南龍山0.0580.0370.007未檢出0.0190.019貴州畢節(jié)0.0570.0360.003未檢出0.0090.022陜西丹鳳0.0860.033未檢出未檢出0.018湖北恩施0.0850.040未檢出未檢出0.015四川達川0.0500.035未檢出未檢出0.0182.6　加樣回收試驗

6、　精密稱取藥材粉末3份，分別加入不同量的金絲桃素對照品，按樣品測定方法操作，金絲桃素平均回收率為100.3%，RSD＝4.17%。3　討論　　①金絲桃素含量測定可用薄層掃描法〔2〕或HPLC法，熒光檢測并配合梯度洗脫〔3〕。本文建立的HPLC法使用紫外檢測器，且為等度洗脫，較上述方法簡便、實用，具有較強的可操作性?！　、趶暮繙y定結果可知：金絲桃素在花中含量最高，葉次之，果實含量低，莖中含量甚微，根中未檢出金絲桃素。故應在花期采收地上部分，棄去莖干；藥材質(zhì)量以花葉多者為優(yōu)。