資源描述：
《人參皂苷對(duì)成纖維細(xì)胞衰老的拮抗作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、人參皂苷對(duì)成纖維細(xì)胞衰老的拮抗作用張敬敬龔琳周鵬劉佳（通訊作者）（湖南長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院410219）【摘要】目的：研宄人參皂苷對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和衰老的影響。方法:自新牛.昆明小鼠身上分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞，加入不同濃度的人參皂苷，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，MTT法分析細(xì)胞活力。結(jié)果：中濃度人參皂苷可以在傳代后6-12d顯著增加活細(xì)胞。結(jié)論：一定濃度的人參皂苷可以延遲細(xì)胞進(jìn)入袞老和死亡狀態(tài)?！娟P(guān)鍵詞】人參皂苷；成纖維細(xì)胞；衰老；生長(zhǎng)【中圖分類號(hào)】R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752（2015）07-0041-03AntagonisticeffectofGinsenosid
2、eonfibroblastsenescenceZhangJingjing,GongLin,ZhouPeng^iuJia.BasicMedicalCollegeofChangshaMedicalCollege^u&rsquojnanProvinceChangsha410219,China［Abstract］Objective:Studiesinmicefibroblastgrowthginsenosidesandtheeffectsofaging.Methods:Sincethenewkunmingmicefibroblastcultivation,addingdifferentconce
3、ntrationsofginsengsaponin,observethecellgrowthcurve,cellvitalitydeterminedbyMTTmethod.Results:Concentrationofginsengsaponincanbeinbatchesafter6tol2dasignificantincreaseinlivingcells.Conclusions:Acertainconcentrationofginsengsaponincandelaycellsintoaginganddeath.【Keywords】Ginsengsaponin;Fibroblast
4、s;Aging;Growth從古至今，中藥人參備受推崇，被譽(yù)為“中藥之王”。近年來研宄者們確認(rèn)了人參具有抑制中樞疲勞、抗腫瘤、抗輻射等作用［1］。木課題組通過前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，己經(jīng)證實(shí)了人參皂苷在一定程度上具有抗衰老作用［2］。人參皂苷抗生物老化是否與直接影響細(xì)胞有關(guān)，木課題側(cè)重于探索人參皂苷對(duì)小獄成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和袞老的影響。1.材料與方法1.1材料1.1.1動(dòng)物SPF級(jí)昆明小鼠，體重（22±2）g，雄性小鼠10只和雌性小鼠20只，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物奮限公司提供，批號(hào)43004700008689,長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院湖南省重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物室飼養(yǎng)。雄雌小鼠按1:2合籠，常規(guī)飼養(yǎng)。
5、1.1.2主要試劑及儀器人參皂背（宏久生物科技公司）、DMEM培養(yǎng)液（Hyclone公司）、胎牛血清（四季青公司）、0.25%胰蛋白酶（Sigma公司），其他試劑為分析純。倒置顯微鏡（德國MOTIC）、細(xì)胞培養(yǎng)箱（Thermo公司）、低速離心機(jī)（Beckman公司）。1.2方法1.2.1乳鼠成纖維細(xì)胞分離與培養(yǎng)取出生12h以內(nèi)的乳鼠，處死后75%酒精浸泡消毒后，取其背部皮膚灑精浸泡消毒，以無Ca2+Mg2+PBS漂洗皮膚，將皮膚剪成lmm2大小均勻平貼于培養(yǎng)瓶中，瓶底朝上倒置5min后翻轉(zhuǎn)，加DEME完全培養(yǎng)基37°C、5%CO2條件下充濕培養(yǎng)，24h后再加入足量的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每2天
6、換1次培養(yǎng)液，1周后將組織塊去除。傳代培養(yǎng)則根據(jù)細(xì)胞自身生長(zhǎng)速度，融合達(dá)60%-70%時(shí)用胰蛋白酶消化，鏡下觀察細(xì)胞冋縮成近圓形時(shí)終止消化，以1:2比例傳代培養(yǎng)，約開始為3-4d傳一代，逐漸延長(zhǎng)為5-9d傳一代。1.2.2細(xì)胞處理待細(xì)胞第8次傳代，細(xì)胞用DMEM洗一次后，加入含有人參皂苻的DMEM和10%胎牛血清，高、中、低三個(gè)濃度組人參皂苷的最終濃度分別為100、10、lmg/dl,未加人參皂苷的細(xì)胞為空白對(duì)照，連續(xù)培養(yǎng)至15代。1.2.3細(xì)胞生長(zhǎng)曲線取第15代成纖維細(xì)胞，以（10×105）/ml的細(xì)胞密度接種于24孔板，繼續(xù)加入人參皂苷培養(yǎng)，每個(gè)濃度均置6個(gè)平行孔，用臺(tái)盼
7、藍(lán)把染法，每2d將各濃度的1孔以胰蛋白酶消化脫落下來后計(jì)存活細(xì)胞數(shù)，共計(jì)12d,以所獲活細(xì)胞數(shù)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。1.2.4MTT實(shí)驗(yàn)取第15代各組成纖維細(xì)胞，以（10×105）/ml的細(xì)胞密度接種于96孔板，每組設(shè)12平行孔。5%CO2、37°C充濕培養(yǎng)72h，離心去上清，每孔加入MTT至終濃度為0.5mg/ml，作用4h后每孔各加入100μIDMSO充分振蕩，用酶標(biāo)儀檢測(cè)570nm波長(zhǎng)處的吸光度（A）值，計(jì)算相對(duì)
