牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)rap-1基因的克隆與序列分析

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1、牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)rap-1基因的克隆與序列分析摘要：對(duì)牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)（ｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａ）潛在藥物靶標(biāo)rａｐ－１的基因進(jìn)行克隆與序列分析。以蘭州株牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)基因組為模板，經(jīng)ｐｃｒ擴(kuò)增獲得了ｒａｐ－１基因，將該基因克隆到ｐｇｅｍ－ｔｅａｓｙｖｅｃｔｏｒ上，對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行ｐｃｒ擴(kuò)增，對(duì)目的基因進(jìn)行酶切鑒定及序列測(cè)定分析。結(jié)果表明，ｒａｐ－１基因長(zhǎng)度為８４６ｂｐ，同源性分析結(jié)果顯示，克隆序列與ｇｅｎｂａｎｋ收錄的巴西株牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)的核苷酸序列同源性為９９．７４％，說(shuō)明蘭州株牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)的ｒａｐ－１與ｇｅｎｂａｎｋ公布的參考基

2、因具有高度同源性，ｒａｐ－１基因具有很高的保守性。關(guān)鍵詞：牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)（ｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａ）；ｒａｐ－１基因；克??；序列分析ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒａｐ－１ｇｅｎｅｉｎｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａｈａｎｌｉｎ１，２，ｚｈａｎｇｊｉ－ｙｕ２，ｙｕａｎｌｉ－ｇａｎｇ１，ｌｉｂｉｎｇ２（１．ｃｏｌｌｅｇｅｏｆｖｅｔｅｒｉｎａｒｙｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｇａｎｓｕａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，ｃｈｉｎａ；２．ｌａｎｚｈｏｕｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆａｎｉｍａｌ牛

3、雙芽巴貝斯蟲(chóng)rap-1基因的克隆與序列分析摘要：對(duì)牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)（ｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａ）潛在藥物靶標(biāo)rａｐ－１的基因進(jìn)行克隆與序列分析。以蘭州株牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)基因組為模板，經(jīng)ｐｃｒ擴(kuò)增獲得了ｒａｐ－１基因，將該基因克隆到ｐｇｅｍ－ｔｅａｓｙｖｅｃｔｏｒ上，對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行ｐｃｒ擴(kuò)增，對(duì)目的基因進(jìn)行酶切鑒定及序列測(cè)定分析。結(jié)果表明，ｒａｐ－１基因長(zhǎng)度為８４６ｂｐ，同源性分析結(jié)果顯示，克隆序列與ｇｅｎｂａｎｋ收錄的巴西株牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)的核苷酸序列同源性為９９．７４％，說(shuō)明蘭州株牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)的ｒａｐ－１與ｇｅｎｂａｎｋ公布的參考基因

4、具有高度同源性，ｒａｐ－１基因具有很高的保守性。關(guān)鍵詞：牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)（ｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａ）；ｒａｐ－１基因；克??；序列分析ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒａｐ－１ｇｅｎｅｉｎｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａｈａｎｌｉｎ１，２，ｚｈａｎｇｊｉ－ｙｕ２，ｙｕａｎｌｉ－ｇａｎｇ１，ｌｉｂｉｎｇ２（１．ｃｏｌｌｅｇｅｏｆｖｅｔｅｒｉｎａｒｙｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｇａｎｓｕａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，ｃｈｉｎａ；２．ｌａｎｚｈｏｕｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆａｎｉｍａｌｓｃ

5、ｉｅｎｃｅ＆ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ｃｈｉｎｅｓｅａｃａｄｅｍｙｏｆａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｓｃｉｅｎｃｅｓ／ｋｅｙｌａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒｖｅｔｅｒｉｎａｒｙｄｒｕｇｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，ｍｉｎｉｓｔｒｙｏｆａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ／ｋｅｙｌａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆｎｅｗａｎｉｍａｌｄｒｕｇｐｒｏｊｅｃｔｏｆｇａｎｓｕｐｒｏｖｉｎｃｅ，ｌａｎｚｈｏｕ７３００５０，ｃｈｉｎａ）ａｂｓｔｒａｃｔ：ｔｈｅｒａｐ－１ｇｅｎｅ，ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔａｒｇｅｔｆｏｒｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｕｓｉｎ

6、ｇｇｅｎｏｍｉｃｄｎａｏｆｌａｎｚｈｏｕｂａｂｅｓｉｏｓｉｓａｓｔｅｍｐｌａｔｅ，ａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐｇｅｍ－ｔｅａｓｙｖｅｃｔｏｒ．ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄｐｌａｓｍｉｄｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙｐｃｒ，ｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆｂ.ｂｉｇｅｍｉｎａｒａｐ－１ｇｅｎｅｗａｓ８４６ｂｐ．ｔｈｅａｌｌｏｇｅｎｉｃａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｈｏｍｏｌｏｇｙｂｅｔｗｅｅｎｃｌｏｎｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅ

7、ｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎｇｅｎｂａｎｋｗａｓａｓｈｉｇｈａｓ９９．７４％，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔｒａｐ－１ｇｅｎｅｗａｓｈｉｇｈｌｙｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ．ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａ；ｒａｐ－１；ｃｌｏｎｅ；ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙsis牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)（ｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａ）在分類(lèi)學(xué)上屬梨形蟲(chóng)目巴貝斯蟲(chóng)科巴貝斯蟲(chóng)屬，該類(lèi)寄生蟲(chóng)寄生于牛的紅細(xì)胞，引起牛的血液原蟲(chóng)病——牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)?。郏保荨Ｅｋp芽巴貝斯蟲(chóng)病又稱(chēng)紅尿熱，一年內(nèi)可暴發(fā)數(shù)次，臨床主要表現(xiàn)為紅細(xì)胞數(shù)量明顯減少、貧血、黃疸、可視黏膜出血和血紅蛋

8、白尿等，可引起宿主死亡［２］，該病是世界公認(rèn)的危害養(yǎng)牛業(yè)的主要寄生蟲(chóng)病之一。牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)入侵紅細(xì)胞的過(guò)程是感染發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，對(duì)紅細(xì)胞的入侵是由位于牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)細(xì)胞膜表面的頂體復(fù)合器以及棒狀體上的相關(guān)蛋