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《黃芩苷對(duì)大鼠肝cyp3a酶的影響》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的影響姓名:楊輝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):藥理學(xué)指導(dǎo)教師:?jiǎn)毯l`201205摘要黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的影響研究生楊輝,。..導(dǎo)師喬海靈教授鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院臨床藥理學(xué)教研室河南鄭州450052中藥是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)寶貴的財(cái)富,對(duì)中國(guó)乃至世界醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展做出了重大的貢獻(xiàn),但由于中藥作用機(jī)理的復(fù)雜性,多數(shù)中藥的體內(nèi)代謝過(guò)程目前尚不明確,使得其在臨床應(yīng)用方面缺少科學(xué)依據(jù)。目前臨床上中藥與化藥,中藥與中藥之間的聯(lián)合應(yīng)用同漸普遍,有關(guān)其所導(dǎo)致的不良反應(yīng)事件的報(bào)道明顯增多,目前對(duì)于中藥及其有效成分的研究已經(jīng)成
2、為熱點(diǎn)。黃芩苷(Baicalin,BG)另J名黃芩甙,是從唇形科多年生雙子葉草本植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根中提取的一種黃酮類單體化合物,是黃芩藥理作用發(fā)揮的主要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。黃芩苷生物活性顯著,具有抗菌、利膽、解熱、降壓、抗氧化、抗HIV病毒以及抗腫瘤等作用。二十世紀(jì)七十年代以來(lái),我國(guó)開始將黃芩苷制成各種類型的制劑,在臨床上廣泛應(yīng)用并取得了很好的療效。隨著黃芩苷及其制劑廣泛使用,臨床上與其他多種藥物聯(lián)合應(yīng)用的機(jī)會(huì)越來(lái)越多,故黃芩苷與其它藥物發(fā)生相互作用風(fēng)險(xiǎn)的比率也越來(lái)越高,安全性問(wèn)題日漸突出。藥
3、物對(duì)CYP450酶的誘導(dǎo)或抑制作用是引起藥物相互作用發(fā)生的主要原因之一,而藥物間的相互作用是導(dǎo)致不良反應(yīng)發(fā)生的重要因素,其中代謝性藥物相互作用的發(fā)生率所占的比例最高。細(xì)胞色素P450酶是藥物在體內(nèi)氧化代謝的重要酶系,參與進(jìn)入機(jī)體約90%的藥物代謝,其中CYP3A酶在肝臟中占近1/3的比例,是CYP450酶系中重要的亞型。有關(guān)中藥復(fù)方制劑對(duì)CYP450酶的影響研究報(bào)道較多,中藥有效成分對(duì)CYP450酶影響的研究較少,因此,進(jìn)一步加強(qiáng)中藥有效成分黃芩苷對(duì)CYP450酶的影響研究具有很大的實(shí)用價(jià)值。摘要研究目的本研究采用體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究黃酮類單體化
4、合物黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的活性的影響,從而闡明和評(píng)價(jià)黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的作用,指導(dǎo)臨床合理有效用藥。研究方法,1.黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的體外抑制作用1.1制備大鼠肝微粒體斷頭處死大鼠,即刻取出肝臟,用4℃預(yù)冷的Tris.HCL緩沖液反復(fù)沖洗,應(yīng)用鈣沉淀法進(jìn)行大鼠肝微粒體的制備,保存于液氮。1.2測(cè)定大鼠肝微粒體蛋白的含量采用Bradfrod法進(jìn)行大鼠肝微粒體蛋白含量的測(cè)定。1.3孵育反應(yīng)CYP3A酶的孵育體系總體積2509L,反應(yīng)體系包含肝微粒體蛋白,NADPH,MgCl2,EDTA,磷酸鹽緩沖液和探針?biāo)幬镞溥_(dá)唑侖,在37。
5、C水浴中進(jìn)行反應(yīng)。分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組加等體積磷酸鹽緩沖液,實(shí)驗(yàn)組加黃芩苷。預(yù)孵育5min后加NADPH啟動(dòng)反應(yīng)。1.4色譜條件DiamonsilC18(200x4.6mm,5rtm)色譜柱;流動(dòng)相為甲醇:乙腈:水=53:13:34;流速lml·min~;柱溫25℃;檢測(cè)波長(zhǎng)220rim;進(jìn)樣量:201aL。1.5咪達(dá)唑侖方法學(xué)考察按照生物樣品的測(cè)定要求,對(duì)大鼠肝微粒體中咪達(dá)唑侖測(cè)定方法的專屬性、精密度、回收率、穩(wěn)定性進(jìn)行考察。1.6黃芩苷方法學(xué)考察建立大鼠肝微粒體中黃芩苷的HPLC測(cè)定方法,并考察方法的專屬性、精密度、穩(wěn)定性等。HPLC色
6、譜條件:51amDiamonsilC18(200x4.6ram)色譜柱;流動(dòng)相為甲醇:水:磷酸=53:47:0.2;流速lml·min一;柱溫25℃;檢測(cè)波長(zhǎng)278nm;進(jìn)樣量為251aL。1.7酶活性測(cè)定HPLC法測(cè)定探針?biāo)幬镞溥_(dá)嘩侖的生物轉(zhuǎn)化程度。2.黃芩苷連續(xù)給藥對(duì)大鼠肝CYP3A的影響2.1制備黃芩苷溶液2.2給藥方案將22只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組每天給予尾靜脈注射黃芩苷(900mg·kg"1),對(duì)照組每天給予尾靜脈注射相同劑量的生理鹽水注射液,均連續(xù)給藥12d,于末次給藥后4h斷頭處死,取肝臟。2.3制備大鼠肝微
7、粒體斷頭處死大鼠,立即取出肝臟,用預(yù)冷的"Iris緩沖液反復(fù)沖洗,采用鈣沉淀法制備肝微粒體,液氮保存。2.4測(cè)定微粒體蛋白的含量選用Bradfrod法進(jìn)行微粒體蛋白含量的測(cè)定。Il摘要2.5孵育反應(yīng)孵育體系總體積為250pL。反應(yīng)體系包含肝微粒體蛋白,NADPH,MgCl2,EDTA,磷酸鹽緩沖液和探針?biāo)幬?咪達(dá)唑侖),在37℃水浴中進(jìn)行反應(yīng),分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。預(yù)孵育5min后加NADPH啟動(dòng)反應(yīng),反應(yīng)時(shí)間為20min。2.6色譜條件同“1:4色譜條件"項(xiàng)下的操作方法。2.7酶活性測(cè)定HPLC法測(cè)定探針?biāo)幬镞溥_(dá)唑侖的生物轉(zhuǎn)化程度。2.8酶動(dòng)力學(xué)
8、參數(shù)的測(cè)定HPLC法測(cè)定探針?biāo)帩舛炔⒂?jì)算酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)。3.統(tǒng)計(jì)分析方法采用SPSSl0.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析,用t檢驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組相比較,P<