黃芩苷對(duì)大鼠肝cyp3a酶的影響

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1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的影響姓名：楊輝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：?jiǎn)毯ｌ`201205摘要黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的影響研究生楊輝，。．．導(dǎo)師喬海靈教授鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院臨床藥理學(xué)教研室河南鄭州450052中藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)寶貴的財(cái)富，對(duì)中國乃至世界醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展做出了重大的貢獻(xiàn)，但由于中藥作用機(jī)理的復(fù)雜性，多數(shù)中藥的體內(nèi)代謝過程目前尚不明確，使得其在臨床應(yīng)用方面缺少科學(xué)依據(jù)。目前臨床上中藥與化藥，中藥與中藥之間的聯(lián)合應(yīng)用同漸普遍，有關(guān)其所導(dǎo)致的不良反應(yīng)事件的報(bào)道明顯增多，目前對(duì)于中藥及其有效成分的研究已經(jīng)成

2、為熱點(diǎn)。黃芩苷(Baicalin，BG)另J名黃芩甙，是從唇形科多年生雙子葉草本植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根中提取的一種黃酮類單體化合物，是黃芩藥理作用發(fā)揮的主要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。黃芩苷生物活性顯著，具有抗菌、利膽、解熱、降壓、抗氧化、抗HIV病毒以及抗腫瘤等作用。二十世紀(jì)七十年代以來，我國開始將黃芩苷制成各種類型的制劑，在臨床上廣泛應(yīng)用并取得了很好的療效。隨著黃芩苷及其制劑廣泛使用，臨床上與其他多種藥物聯(lián)合應(yīng)用的機(jī)會(huì)越來越多，故黃芩苷與其它藥物發(fā)生相互作用風(fēng)險(xiǎn)的比率也越來越高，安全性問題日漸突出。藥

3、物對(duì)CYP450酶的誘導(dǎo)或抑制作用是引起藥物相互作用發(fā)生的主要原因之一，而藥物間的相互作用是導(dǎo)致不良反應(yīng)發(fā)生的重要因素，其中代謝性藥物相互作用的發(fā)生率所占的比例最高。細(xì)胞色素P450酶是藥物在體內(nèi)氧化代謝的重要酶系，參與進(jìn)入機(jī)體約90％的藥物代謝，其中CYP3A酶在肝臟中占近1／3的比例，是CYP450酶系中重要的亞型。有關(guān)中藥復(fù)方制劑對(duì)CYP450酶的影響研究報(bào)道較多，中藥有效成分對(duì)CYP450酶影響的研究較少，因此，進(jìn)一步加強(qiáng)中藥有效成分黃芩苷對(duì)CYP450酶的影響研究具有很大的實(shí)用價(jià)值。摘要研究目的本研究采用體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究黃酮類單體化

4、合物黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的活性的影響，從而闡明和評(píng)價(jià)黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的作用，指導(dǎo)臨床合理有效用藥。研究方法，1．黃芩苷對(duì)大鼠肝CYP3A酶的體外抑制作用1．1制備大鼠肝微粒體斷頭處死大鼠，即刻取出肝臟，用4℃預(yù)冷的Tris．HCL緩沖液反復(fù)沖洗，應(yīng)用鈣沉淀法進(jìn)行大鼠肝微粒體的制備，保存于液氮。1．2測(cè)定大鼠肝微粒體蛋白的含量采用Bradfrod法進(jìn)行大鼠肝微粒體蛋白含量的測(cè)定。1．3孵育反應(yīng)CYP3A酶的孵育體系總體積2509L，反應(yīng)體系包含肝微粒體蛋白，NADPH，MgCl2，EDTA，磷酸鹽緩沖液和探針?biāo)幬镞溥_(dá)唑侖，在37。

5、C水浴中進(jìn)行反應(yīng)。分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組加等體積磷酸鹽緩沖液，實(shí)驗(yàn)組加黃芩苷。預(yù)孵育5min后加NADPH啟動(dòng)反應(yīng)。1．4色譜條件DiamonsilC18(200x4．6mm，5rtm)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇：乙腈：水=53：13：34；流速lml·min～；柱溫25℃；檢測(cè)波長220rim；進(jìn)樣量：201aL。1．5咪達(dá)唑侖方法學(xué)考察按照生物樣品的測(cè)定要求，對(duì)大鼠肝微粒體中咪達(dá)唑侖測(cè)定方法的專屬性、精密度、回收率、穩(wěn)定性進(jìn)行考察。1．6黃芩苷方法學(xué)考察建立大鼠肝微粒體中黃芩苷的HPLC測(cè)定方法，并考察方法的專屬性、精密度、穩(wěn)定性等。HPLC色

6、譜條件：51amDiamonsilC18(200x4．6ram)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇：水：磷酸=53：47：0．2；流速lml·min一；柱溫25℃；檢測(cè)波長278nm；進(jìn)樣量為251aL。1．7酶活性測(cè)定HPLC法測(cè)定探針?biāo)幬镞溥_(dá)嘩侖的生物轉(zhuǎn)化程度。2．黃芩苷連續(xù)給藥對(duì)大鼠肝CYP3A的影響2．1制備黃芩苷溶液2．2給藥方案將22只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組每天給予尾靜脈注射黃芩苷(900mg·kg"1)，對(duì)照組每天給予尾靜脈注射相同劑量的生理鹽水注射液，均連續(xù)給藥12d，于末次給藥后4h斷頭處死，取肝臟。2．3制備大鼠肝微

7、粒體斷頭處死大鼠，立即取出肝臟，用預(yù)冷的"Iris緩沖液反復(fù)沖洗，采用鈣沉淀法制備肝微粒體，液氮保存。2．4測(cè)定微粒體蛋白的含量選用Bradfrod法進(jìn)行微粒體蛋白含量的測(cè)定。Il摘要2．5孵育反應(yīng)孵育體系總體積為250pL。反應(yīng)體系包含肝微粒體蛋白，NADPH，MgCl2，EDTA，磷酸鹽緩沖液和探針?biāo)幬?咪達(dá)唑侖)，在37℃水浴中進(jìn)行反應(yīng)，分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。預(yù)孵育5min后加NADPH啟動(dòng)反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為20min。2．6色譜條件同“1：4色譜條件"項(xiàng)下的操作方法。2．7酶活性測(cè)定HPLC法測(cè)定探針?biāo)幬镞溥_(dá)唑侖的生物轉(zhuǎn)化程度。2．8酶動(dòng)力學(xué)

8、參數(shù)的測(cè)定HPLC法測(cè)定探針?biāo)帩舛炔⒂?jì)算酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)。3．統(tǒng)計(jì)分析方法采用SPSSl0．0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，用t檢驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組相比較，P<