bmp-4誘導(dǎo)上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究

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1、萬方數(shù)據(jù)中圖分類號(hào)UDCR363．2／R735．7610碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q533密級(jí)公玨BMP．4誘導(dǎo)上皮．間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究AstudyontumorinvasionandmetastasispromotedbyBMP--4—-inducedepithelial-mesenchymaltransitioninhepatocellularcarcinoma作者學(xué)科研究學(xué)院(指導(dǎo)黃金霖基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)湘雅醫(yī)院申茲教授答辯委員會(huì)主席—巴叢』二豸中南大學(xué)二零一四年五月名業(yè)向所師姓專方氛教萬方數(shù)據(jù)學(xué)位論文原創(chuàng)性

2、聲明Y111211611181151111151131111本人鄭重聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)～切相關(guān)責(zé)任。作者簽名：藍(lán)魚：塞日期：2璺盟年』月叢日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者和指導(dǎo)教師完全了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文

3、的規(guī)定：即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版；本人允許本學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢詫⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文待解密后適應(yīng)本聲明。作者簽名：耋壘：疊導(dǎo)師簽名萬方數(shù)據(jù)摘要BMP．4誘導(dǎo)上皮．間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究背景：肝癌，尤其是肝細(xì)胞癌(HCC)，是全世界最常見的惡性腫瘤之一，也是腫瘤相關(guān)死亡率排名第三的惡性疾病。盡管有研究提示HCC是一種多步驟多階段的致癌過程，其潛在的分子致病機(jī)制還不完全明確，很多關(guān)鍵性的問

4、題仍未解決。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)描述的是細(xì)胞逐漸失去典型的上皮細(xì)胞特征并獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的生物學(xué)過程，也是啟動(dòng)腫瘤細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制。骨形成蛋白(BMP)是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF．p超家族的成員，在生長(zhǎng)發(fā)育和腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用，且其下游信號(hào)通路與EMT的信號(hào)通路有交叉，且有研究表明在卵巢癌和胰腺癌細(xì)胞系中，BMP．4可誘導(dǎo)EMT的發(fā)生并使細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。因此，本研究擬在人肝癌細(xì)胞系中，明確BMP．4對(duì)EMT的影響，并觀察BMP．4對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡、侵襲與轉(zhuǎn)移等方面的影響。材料和方法：本研究選用永生化肝細(xì)

5、胞系L02，及肝癌細(xì)胞中低侵襲轉(zhuǎn)移力株HepG2與高侵襲轉(zhuǎn)移力株HCCLM3，通過加入外源性重組人BMP-4蛋白和／或拮抗劑Noggin蛋白的影響，采用MTT增殖檢測(cè)、平板集落形成試驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell小室試驗(yàn)等方法觀察BMP．4蛋白對(duì)肝癌細(xì)胞系生長(zhǎng)、增殖、細(xì)胞周期分布與凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移等特性的影響。通過普通PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR及免疫萬方數(shù)據(jù)熒光技術(shù)等檢測(cè)上皮及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)，以明確BMP．4對(duì)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞系發(fā)生EMT的影響。結(jié)果：BMP．4對(duì)L02細(xì)胞增殖及平板集落形成能力無顯著影響，當(dāng)濃度___50ng／m

6、L時(shí)可促進(jìn)肝癌細(xì)胞系HepG2增殖?？纱碳epG2的平板集落形成能力(135．333±11．015V．S．46．667±11．719，P=0．001)。拮抗劑Noggin可顯著減少HCCLM3細(xì)胞系集落形成數(shù)量(135．000+7．000V．S．45．000_+13．454，P=0．001)。BMP．4可增加肝癌細(xì)胞系S期的細(xì)胞比例減少凋亡，并能顯著增加肝細(xì)胞系L02在G2／M期的細(xì)胞比例以抑制凋亡(12．567±O．998％V．S．8．067±2．078，P=0．028)。在BMP．4的作用下，L02和肝癌細(xì)胞系HepG2表達(dá)基質(zhì)

7、金屬蛋白酶舢．2及MMP一9的水平上調(diào)(前者分別為2．481±0．819V．S．0．795±O．215，2．817±0．763V．S．0．908±0．258，P值分別為O．026和O．015；后者分別為4．242___0．862V．S．0．644±0．236，3．716+1．334V．S．0．541±O．169，P值分別為O．002和O．015)，并促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。當(dāng)用終濃度為50ng／mL的外源性BMP-4蛋白作用肝癌細(xì)胞系約5天時(shí)間后，顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變以及上皮細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)下調(diào)、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)上調(diào)等特征，

8、提示BMP．4能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞系發(fā)生EMT。結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)BMP．4濃度>／50ng／mL時(shí)可促進(jìn)HepG2細(xì)胞增殖，但改變BMP一4濃度對(duì)L02及HCCLM3細(xì)胞增殖無顯著影響；BMP．4可促進(jìn)劃痕愈合，提高細(xì)胞遷移