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1、酶免法檢測丙肝病毒核心抗原在獻(xiàn)血者篩查中應(yīng)用研究【摘要】目的：分析基層血站大規(guī)模篩查獻(xiàn)血者HCV感染采用ELISA方法聯(lián)合檢測抗HCV和HCVC抗原的可行性。方法：采用ELISA法檢測獻(xiàn)血者樣本抗HCV和HCVC抗原，結(jié)果：與HCVPCR法進(jìn)行比較分析。結(jié)果：獻(xiàn)血者780份抗HCV初復(fù)檢陰性樣本中，HCVC抗原檢測結(jié)果均為陰性。56份抗HCV初復(fù)檢陽性樣本中，HCVC抗原檢測陽性16份，HCVPCR陽性17份；11份抗HCV初檢或復(fù)檢陽性樣本中，HCVC抗原檢測陽性1份，HCVPCR陽性1份；17份抗HCV初檢或復(fù)檢或初復(fù)檢結(jié)果灰區(qū)樣本中，HCVC抗原
2、檢測陽性3份，HCVPCR陽性4份。結(jié)論：ELISA法檢測HCVC抗原靈敏度及特異性均較高，適合基層血站開展對(duì)獻(xiàn)血者HCV大規(guī)模篩查，也適合基層醫(yī)院開展對(duì)患者輸血前HCV感染的檢測?！娟P(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒；核心抗原；核酸檢測【中圖分類號(hào)】R446【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1004-7484(2013)03-0595-01丙型肝炎主要經(jīng)過血液傳播，是一種嚴(yán)重的經(jīng)血傳播疾病，目前沒有較好的預(yù)防和治療方法。我國是丙型肝炎感染大國，在一般人群中，丙型肝炎病毒感染率達(dá)3.2%。我國獻(xiàn)血法規(guī)定，對(duì)獻(xiàn)血者必須進(jìn)行HCV檢測，目前多數(shù)血站篩查獻(xiàn)血者是否感染HCV采用
3、不同廠家試劑兩遍檢測抗-HCVo酶免疫法檢測抗-HCV窗口期長（大約70天），而HCV感染者在發(fā)病前12天即可具有傳染性［1］。酶免法檢測HCVC抗原可縮短HCV窗口期至15天［2］,是否適合獻(xiàn)血者大量篩查，我們對(duì)此進(jìn)行了分析。1材料和方法1.1樣本從本血站2012年6月至12月無償獻(xiàn)血者中抽選酶免法抗-HCV初檢、復(fù)檢均陽性樣本56份，抗-HCV初檢、復(fù)檢均為陰性樣本780份，僅抗-HCV初檢或僅復(fù)檢陽性樣本11份，灰區(qū)樣本（初檢或復(fù)檢有一次灰區(qū)或初復(fù)檢均灰區(qū)，灰區(qū)二cutoffX0.8）17份，共計(jì)864份樣本。1.2試劑和儀器抗-HCV初檢試劑為
4、上?？迫A生物工程股份有限公司提供，批號(hào)201207041等；抗-HCV復(fù)檢試劑，英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司提供，批號(hào)2012065815等;HCVCAg檢測試劑，湖南康潤藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)20121001；深圳愛康UranusAE200全自動(dòng)酶標(biāo)儀；美國ABI7300型基因擴(kuò)增儀，試劑由深圳凱杰生物工程有限公司提供，批號(hào)20121101c1.3方法獻(xiàn)血者血清標(biāo)本經(jīng)抗-HCVELISA試劑初、復(fù)檢后，將所需標(biāo)本分裝并置-8（rc條件下存放，確保被檢標(biāo)本僅凍融一次。864份樣本均檢測HCVC抗原。將抗-HCV初檢、復(fù)檢均陽性和僅初檢或復(fù)檢陽性及灰區(qū)血
5、清標(biāo)本共84份樣本同時(shí)進(jìn)行HCVC抗原和HCVRT-PCR檢測。具體操作方法和結(jié)果判斷，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行，記錄檢測結(jié)果。2結(jié)果2.1780份抗-HCV初檢、復(fù)檢均合格的獻(xiàn)血者樣本中，ELISA檢測HCVC抗原結(jié)果均為陰性(780/780)。2.256份抗-HCV初檢、復(fù)檢均陽性的獻(xiàn)血者樣本中，HCVc抗原檢測陽性樣本16份，HCVPCR檢測陽性樣本17份。僅抗-HCV初檢或僅復(fù)檢陽性11份樣本中，HCVc抗原檢測陽性樣本1份，HCVPCR檢測陽性樣本1份?？?HCV檢測結(jié)果灰區(qū)樣本17份中，HCVc抗原檢測陽性樣本3份，HCVPCR檢測陽性樣本4
6、份。見附表1。檢測結(jié)果采用x2檢驗(yàn)，P>0.05,84份樣本中HCVC抗原酶免疫法檢出陽性率與HCVPCR方法陽性檢出率無顯著性差別。兩種方法檢出陽性符合率達(dá)90%以上。3討論衛(wèi)生部發(fā)布的《血站技術(shù)操作規(guī)程》【2012］中明確要求，獻(xiàn)血者丙型肝炎病毒(HCV)感染標(biāo)志物及其檢測方法有2種選擇，可任選其中1種：1)采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測HCV抗體或聯(lián)合檢測HCV抗原和抗體；2)采用1種ELISA試劑檢測HCV抗體或聯(lián)合檢測HCV抗原和抗體，采用1種試劑檢測HCV核酸。大多數(shù)血站目前廣泛選用的檢測方法是采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑
7、檢測HCV抗體，抗HCV試劑因不同生產(chǎn)廠家所用抗原片段及抗原質(zhì)量不同，試劑的靈敏度和特異性存在一定差異，從而導(dǎo)致抗-HCV檢測結(jié)果的不一致。ELISA檢測抗-HCV窗口期長，可出現(xiàn)漏檢和假陽性情況［3］。應(yīng)用PCR方法檢測HCV特異性強(qiáng),靈敏度高，是HCV感染輔助確證技術(shù)之一，但該方法要求條件高，操作復(fù)雜，需具備較高的設(shè)備、設(shè)施及技術(shù)條件，檢測費(fèi)用也高，易出現(xiàn)假陽性和假陰性，并不適合基層血站對(duì)獻(xiàn)血者大規(guī)模篩查。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與檢測抗HCV相比，ELISA方法檢測HCVC抗原具有較高的特異性(780/780)；對(duì)抗-HCV初檢和復(fù)檢均陽性、僅初檢或復(fù)檢陽
8、性、檢測結(jié)果灰區(qū)等84份血清標(biāo)本，ELISA方法檢測HCVC抗原的檢測結(jié)果(20/84)與HC
