酶免法檢測(cè)丙肝病毒核心抗原在獻(xiàn)血者篩查中應(yīng)用研究

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1、酶免法檢測(cè)丙肝病毒核心抗原在獻(xiàn)血者篩查中應(yīng)用研究【摘要】目的:分析基層血站大規(guī)模篩查獻(xiàn)血者HCV感染采用ELISA方法聯(lián)合檢測(cè)抗HCV和HCVC抗原的可行性。方法:采用ELISA法檢測(cè)獻(xiàn)血者樣本抗HCV和HCVC抗原,結(jié)果:與HCVPCR法進(jìn)行比較分析。結(jié)果:獻(xiàn)血者780份抗HCV初復(fù)檢陰性樣本中,HCVC抗原檢測(cè)結(jié)果均為陰性。56份抗HCV初復(fù)檢陽(yáng)性樣本中,HCVC抗原檢測(cè)陽(yáng)性16份,HCVPCR陽(yáng)性17份;11份抗HCV初檢或復(fù)檢陽(yáng)性樣本中,HCVC抗原檢測(cè)陽(yáng)性1份,HCVPCR陽(yáng)性1份;17份抗HCV初檢或復(fù)檢或初復(fù)檢結(jié)果灰區(qū)樣本中,HCVC抗原

2、檢測(cè)陽(yáng)性3份,HCVPCR陽(yáng)性4份。結(jié)論:ELISA法檢測(cè)HCVC抗原靈敏度及特異性均較高,適合基層血站開(kāi)展對(duì)獻(xiàn)血者HCV大規(guī)模篩查,也適合基層醫(yī)院開(kāi)展對(duì)患者輸血前HCV感染的檢測(cè)?!娟P(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒;核心抗原;核酸檢測(cè)【中圖分類號(hào)】R446【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1004-7484(2013)03-0595-01丙型肝炎主要經(jīng)過(guò)血液傳播,是一種嚴(yán)重的經(jīng)血傳播疾病,目前沒(méi)有較好的預(yù)防和治療方法。我國(guó)是丙型肝炎感染大國(guó),在一般人群中,丙型肝炎病毒感染率達(dá)3.2%。我國(guó)獻(xiàn)血法規(guī)定,對(duì)獻(xiàn)血者必須進(jìn)行HCV檢測(cè),目前多數(shù)血站篩查獻(xiàn)血者是否感染HCV采用

3、不同廠家試劑兩遍檢測(cè)抗-HCVo酶免疫法檢測(cè)抗-HCV窗口期長(zhǎng)(大約70天),而HCV感染者在發(fā)病前12天即可具有傳染性[1]。酶免法檢測(cè)HCVC抗原可縮短HCV窗口期至15天[2],是否適合獻(xiàn)血者大量篩查,我們對(duì)此進(jìn)行了分析。1材料和方法1.1樣本從本血站2012年6月至12月無(wú)償獻(xiàn)血者中抽選酶免法抗-HCV初檢、復(fù)檢均陽(yáng)性樣本56份,抗-HCV初檢、復(fù)檢均為陰性樣本780份,僅抗-HCV初檢或僅復(fù)檢陽(yáng)性樣本11份,灰區(qū)樣本(初檢或復(fù)檢有一次灰區(qū)或初復(fù)檢均灰區(qū),灰區(qū)二cutoffX0.8)17份,共計(jì)864份樣本。1.2試劑和儀器抗-HCV初檢試劑為

4、上??迫A生物工程股份有限公司提供,批號(hào)201207041等;抗-HCV復(fù)檢試劑,英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技有限公司提供,批號(hào)2012065815等;HCVCAg檢測(cè)試劑,湖南康潤(rùn)藥業(yè)有限公司提供,批號(hào)20121001;深圳愛(ài)康UranusAE200全自動(dòng)酶標(biāo)儀;美國(guó)ABI7300型基因擴(kuò)增儀,試劑由深圳凱杰生物工程有限公司提供,批號(hào)20121101c1.3方法獻(xiàn)血者血清標(biāo)本經(jīng)抗-HCVELISA試劑初、復(fù)檢后,將所需標(biāo)本分裝并置-8(rc條件下存放,確保被檢標(biāo)本僅凍融一次。864份樣本均檢測(cè)HCVC抗原。將抗-HCV初檢、復(fù)檢均陽(yáng)性和僅初檢或復(fù)檢陽(yáng)性及灰區(qū)血

5、清標(biāo)本共84份樣本同時(shí)進(jìn)行HCVC抗原和HCVRT-PCR檢測(cè)。具體操作方法和結(jié)果判斷,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行,記錄檢測(cè)結(jié)果。2結(jié)果2.1780份抗-HCV初檢、復(fù)檢均合格的獻(xiàn)血者樣本中,ELISA檢測(cè)HCVC抗原結(jié)果均為陰性(780/780)。2.256份抗-HCV初檢、復(fù)檢均陽(yáng)性的獻(xiàn)血者樣本中,HCVc抗原檢測(cè)陽(yáng)性樣本16份,HCVPCR檢測(cè)陽(yáng)性樣本17份。僅抗-HCV初檢或僅復(fù)檢陽(yáng)性11份樣本中,HCVc抗原檢測(cè)陽(yáng)性樣本1份,HCVPCR檢測(cè)陽(yáng)性樣本1份。抗-HCV檢測(cè)結(jié)果灰區(qū)樣本17份中,HCVc抗原檢測(cè)陽(yáng)性樣本3份,HCVPCR檢測(cè)陽(yáng)性樣本4

6、份。見(jiàn)附表1。檢測(cè)結(jié)果采用x2檢驗(yàn),P>0.05,84份樣本中HCVC抗原酶免疫法檢出陽(yáng)性率與HCVPCR方法陽(yáng)性檢出率無(wú)顯著性差別。兩種方法檢出陽(yáng)性符合率達(dá)90%以上。3討論衛(wèi)生部發(fā)布的《血站技術(shù)操作規(guī)程》【2012]中明確要求,獻(xiàn)血者丙型肝炎病毒(HCV)感染標(biāo)志物及其檢測(cè)方法有2種選擇,可任選其中1種:1)采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測(cè)HCV抗體或聯(lián)合檢測(cè)HCV抗原和抗體;2)采用1種ELISA試劑檢測(cè)HCV抗體或聯(lián)合檢測(cè)HCV抗原和抗體,采用1種試劑檢測(cè)HCV核酸。大多數(shù)血站目前廣泛選用的檢測(cè)方法是采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑

7、檢測(cè)HCV抗體,抗HCV試劑因不同生產(chǎn)廠家所用抗原片段及抗原質(zhì)量不同,試劑的靈敏度和特異性存在一定差異,從而導(dǎo)致抗-HCV檢測(cè)結(jié)果的不一致。ELISA檢測(cè)抗-HCV窗口期長(zhǎng),可出現(xiàn)漏檢和假陽(yáng)性情況[3]。應(yīng)用PCR方法檢測(cè)HCV特異性強(qiáng),靈敏度高,是HCV感染輔助確證技術(shù)之一,但該方法要求條件高,操作復(fù)雜,需具備較高的設(shè)備、設(shè)施及技術(shù)條件,檢測(cè)費(fèi)用也高,易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性,并不適合基層血站對(duì)獻(xiàn)血者大規(guī)模篩查。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與檢測(cè)抗HCV相比,ELISA方法檢測(cè)HCVC抗原具有較高的特異性(780/780);對(duì)抗-HCV初檢和復(fù)檢均陽(yáng)性、僅初檢或復(fù)檢陽(yáng)

8、性、檢測(cè)結(jié)果灰區(qū)等84份血清標(biāo)本,ELISA方法檢測(cè)HCVC抗原的檢測(cè)結(jié)果(20/84)與HC

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