根結(jié)線蟲的種類鑒定與分子鑒定技術(shù)的探究

根結(jié)線蟲的種類鑒定與分子鑒定技術(shù)的探究

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1、萬方數(shù)據(jù)QingdaoAgriculturalUniversityTheThesisofProfessionalMasterIdemificationofRoot..knotNematodesandDevelopmemofPCRAssaysforIdentificationGraduatewi吐1ProfessionalMasterDegree:WangLeileiMentor:ZhaoHonghaiTypeofPro.fessionalDegree:MasterofAgriculturalExtensionAcademicfield:PlantPr

2、otection刪萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加以標注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生虢豇毳時間:如.伊鈿沏日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、

3、匯編學(xué)位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生虢翰厄新簽%惺形時間:洳,爐∥月瑚時間:知膨年石月幻日萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文摘要根結(jié)線蟲的種類鑒定與分子鑒定技術(shù)的探究摘要根結(jié)線蟲(Meloidogynespp.)是專性內(nèi)寄生線蟲,在世界上分布普遍,寄主范圍非常廣泛,是對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)危害最大的植物病原線蟲之一。山東省屬暖溫帶季風(fēng)氣候類型,降水集中,雨熱同季,根結(jié)線蟲能夠很好的生存和繁殖。本研究對山東省不同地區(qū)、不同寄主的根結(jié)線蟲和外省部分地區(qū)的煙草根結(jié)線蟲

4、進行了標樣的采集、形態(tài)學(xué)鑒定和分子鑒定,探究了北方根結(jié)線蟲和南方根結(jié)線蟲的PCR快速鑒定和檢測方法等。主要研究結(jié)果如下:對在山東省采集到的16份大姜土樣進行線蟲分離,共得到6個大姜癩皮病病原群體的標樣。通過對這6個根結(jié)線蟲群體進行形態(tài)學(xué)鑒定、rDNA-ITS區(qū)序列分析、mtDNA-PCR擴增分析,確定引起這6份大姜癩皮病標樣的病原為南方根結(jié)線蟲(Mincognita)。通過對冬季大姜癩皮病病土的采集、分離、恒溫(27"C)處理,初步確定大姜癩皮病病原的越冬態(tài)是卵。本實驗室在山東省膠州市首次發(fā)現(xiàn)紫葉小檗的根結(jié)線蟲病,并采集了樣品和對病原進行了初步鑒定。

5、由形態(tài)學(xué)鑒定、ITS區(qū)序列分析和mtDNA-PCR的擴增結(jié)果分析得到:引起紫葉小檗根結(jié)線蟲痛的病原為北方根結(jié)線蟲(Mhapla)。目前,尚未見到北方根結(jié)線蟲侵染紫葉小檗的報道,紫葉小檗是北方根結(jié)線蟲的新寄主。隨著煙草種植面積的增加,多數(shù)煙田的連作,煙草品種的變化以及耕作制度變化,煙草根結(jié)線蟲的危害越來越嚴重。本研究對山東省和其他幾個省份的14個煙草根結(jié)線蟲群體進行了鑒定,鑒定結(jié)果為13個根結(jié)線蟲群體為南方根結(jié)線蟲,1個根結(jié)線蟲群體為北方根結(jié)線蟲。另外,對來自山東省其他6種根結(jié)線蟲寄主上的7個根結(jié)線蟲群體進行了鑒定,6個根結(jié)線蟲群體為南方根結(jié)線蟲,1個

6、根結(jié)線蟲群體為北方根結(jié)線蟲。本研究通過從GenBank中篩選北方根結(jié)線蟲和南方根結(jié)線蟲的特異性序列,設(shè)計了北方根結(jié)線蟲和南方根結(jié)線蟲的特異性引物,并對其進行驗證;其中南方根結(jié)線蟲的特異性引物不能準確的鑒定該物種,而北方根結(jié)線蟲的特異性引物能夠準確快速的鑒定北方根結(jié)線蟲。因此,本研究確定了北方根結(jié)線蟲的特異性引物一對(MhPPF/R)。關(guān)鍵詞:根結(jié)線蟲;種類鑒定;新寄主;特異性引物萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文AbstractIdentillicationofRoot.knotNematodesandDevelopmentofPCRAssaysf

7、orIdentificationAbstractRoot-knotnematodes(Mefoidogynespp.)areobligateendoparasites.nleyarewidelydistributedthroughouttheworldandhaveawiderangeofhosts,causingconsiderabledamagetoanumberofcrops.Shandongpmvince,beingofawarmtemperatemonsoonclimatetype,isasuitableareaforroot-knotne

8、matode’Soccu.,'Tence.Inthisstudy,morphologicalandmolec

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