根結(jié)線蟲的種類鑒定與分子鑒定技術(shù)的探究

根結(jié)線蟲的種類鑒定與分子鑒定技術(shù)的探究

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時(shí)間:2019-02-28

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1、萬方數(shù)據(jù)QingdaoAgriculturalUniversityTheThesisofProfessionalMasterIdemificationofRoot..knotNematodesandDevelopmemofPCRAssaysforIdentificationGraduatewi吐1ProfessionalMasterDegree:WangLeileiMentor:ZhaoHonghaiTypeofPro.fessionalDegree:MasterofAgriculturalExtensionAcademicfield:PlantPr

2、otection刪萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生虢豇毳時(shí)間:如.伊鈿沏日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、

3、匯編學(xué)位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生虢翰厄新簽%惺形時(shí)間:洳,爐∥月瑚時(shí)間:知膨年石月幻日萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文摘要根結(jié)線蟲的種類鑒定與分子鑒定技術(shù)的探究摘要根結(jié)線蟲(Meloidogynespp.)是專性內(nèi)寄生線蟲,在世界上分布普遍,寄主范圍非常廣泛,是對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)危害最大的植物病原線蟲之一。山東省屬暖溫帶季風(fēng)氣候類型,降水集中,雨熱同季,根結(jié)線蟲能夠很好的生存和繁殖。本研究對山東省不同地區(qū)、不同寄主的根結(jié)線蟲和外省部分地區(qū)的煙草根結(jié)線蟲

4、進(jìn)行了標(biāo)樣的采集、形態(tài)學(xué)鑒定和分子鑒定,探究了北方根結(jié)線蟲和南方根結(jié)線蟲的PCR快速鑒定和檢測方法等。主要研究結(jié)果如下:對在山東省采集到的16份大姜土樣進(jìn)行線蟲分離,共得到6個(gè)大姜癩皮病病原群體的標(biāo)樣。通過對這6個(gè)根結(jié)線蟲群體進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定、rDNA-ITS區(qū)序列分析、mtDNA-PCR擴(kuò)增分析,確定引起這6份大姜癩皮病標(biāo)樣的病原為南方根結(jié)線蟲(Mincognita)。通過對冬季大姜癩皮病病土的采集、分離、恒溫(27"C)處理,初步確定大姜癩皮病病原的越冬態(tài)是卵。本實(shí)驗(yàn)室在山東省膠州市首次發(fā)現(xiàn)紫葉小檗的根結(jié)線蟲病,并采集了樣品和對病原進(jìn)行了初步鑒定。

5、由形態(tài)學(xué)鑒定、ITS區(qū)序列分析和mtDNA-PCR的擴(kuò)增結(jié)果分析得到:引起紫葉小檗根結(jié)線蟲痛的病原為北方根結(jié)線蟲(Mhapla)。目前,尚未見到北方根結(jié)線蟲侵染紫葉小檗的報(bào)道,紫葉小檗是北方根結(jié)線蟲的新寄主。隨著煙草種植面積的增加,多數(shù)煙田的連作,煙草品種的變化以及耕作制度變化,煙草根結(jié)線蟲的危害越來越嚴(yán)重。本研究對山東省和其他幾個(gè)省份的14個(gè)煙草根結(jié)線蟲群體進(jìn)行了鑒定,鑒定結(jié)果為13個(gè)根結(jié)線蟲群體為南方根結(jié)線蟲,1個(gè)根結(jié)線蟲群體為北方根結(jié)線蟲。另外,對來自山東省其他6種根結(jié)線蟲寄主上的7個(gè)根結(jié)線蟲群體進(jìn)行了鑒定,6個(gè)根結(jié)線蟲群體為南方根結(jié)線蟲,1個(gè)

6、根結(jié)線蟲群體為北方根結(jié)線蟲。本研究通過從GenBank中篩選北方根結(jié)線蟲和南方根結(jié)線蟲的特異性序列,設(shè)計(jì)了北方根結(jié)線蟲和南方根結(jié)線蟲的特異性引物,并對其進(jìn)行驗(yàn)證;其中南方根結(jié)線蟲的特異性引物不能準(zhǔn)確的鑒定該物種,而北方根結(jié)線蟲的特異性引物能夠準(zhǔn)確快速的鑒定北方根結(jié)線蟲。因此,本研究確定了北方根結(jié)線蟲的特異性引物一對(MhPPF/R)。關(guān)鍵詞:根結(jié)線蟲;種類鑒定;新寄主;特異性引物萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文AbstractIdentillicationofRoot.knotNematodesandDevelopmentofPCRAssaysf

7、orIdentificationAbstractRoot-knotnematodes(Mefoidogynespp.)areobligateendoparasites.nleyarewidelydistributedthroughouttheworldandhaveawiderangeofhosts,causingconsiderabledamagetoanumberofcrops.Shandongpmvince,beingofawarmtemperatemonsoonclimatetype,isasuitableareaforroot-knotne

8、matode’Soccu.,'Tence.Inthisstudy,morphologicalandmolec

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