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《嚴(yán)重?zé)齻蟠笫蠊撬琛熬藓思?xì)胞被噬現(xiàn)象”機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文嚴(yán)重?zé)齻蟠笫蠊撬琛熬藓思?xì)胞被噬現(xiàn)象”機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究摘要本室前期研究發(fā)現(xiàn)，單純放射損傷、嚴(yán)重?zé)齻蜔龥_復(fù)合傷的大鼠、犬骨髓巨核細(xì)胞退變，中性粒細(xì)胞進(jìn)入巨核細(xì)胞胞漿內(nèi)將其噬食，命名為“巨核細(xì)胞被噬現(xiàn)象”(megakaryocytophagia)，并認(rèn)為這是嚴(yán)重創(chuàng)傷時(shí)血小板數(shù)量減少、功能降低的主要原因之一。血小板數(shù)量和功能的降低是引發(fā)機(jī)體出血、感染、多器官功能衰竭的重要因素，是嚴(yán)重創(chuàng)傷救治的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。但巨核細(xì)胞被噬現(xiàn)象的發(fā)生是中性粒細(xì)胞發(fā)揮清除機(jī)體退變細(xì)胞的功能，還是巨核細(xì)胞受
2、損后發(fā)出某種信號(hào)吸引中性粒細(xì)胞前往，何種細(xì)胞占主導(dǎo)地位，未見有文獻(xiàn)報(bào)道。關(guān)于巨核細(xì)胞體內(nèi)有粒細(xì)胞或其他’血細(xì)胞的現(xiàn)象早有文獻(xiàn)報(bào)道，但對(duì)其性質(zhì)、發(fā)生機(jī)理和意義有不同的看法。有觀點(diǎn)認(rèn)為巨核細(xì)胞體內(nèi)的其它細(xì)胞與巨核細(xì)胞是共生的，兩者獨(dú)立存在、沒有任何關(guān)系；有人認(rèn)為巨核細(xì)胞體內(nèi)的紅細(xì)胞是兩者的重疊；還有人認(rèn)為巨核細(xì)胞有游移的能力，能主動(dòng)將其它細(xì)胞包繞入體內(nèi)等等。近年來，巨核細(xì)胞體內(nèi)存在其它血細(xì)胞的現(xiàn)象更加引起學(xué)者們的關(guān)注。在血小板減少性紫癜的動(dòng)物模型、特發(fā)性骨髓纖維化病人的骨髓活檢及骨髓纖維化動(dòng)物模型、轉(zhuǎn)
3、染血小板生成素(TPO)的小鼠、核轉(zhuǎn)錄因子GATA一1低表達(dá)的小鼠等情況均發(fā)生不同程度的進(jìn)入巨核細(xì)胞的中性粒細(xì)胞數(shù)量增加；同時(shí)伴有外周血血小板數(shù)量減少的現(xiàn)象。巨核細(xì)胞是血小板生成的前體細(xì)胞，巨核細(xì)胞的病理改變及其機(jī)能狀態(tài)直接影響到血小板的產(chǎn)生與補(bǔ)充；因此，研究巨核細(xì)胞在疾病和損傷情況的改變具有十分重要的意義。本實(shí)驗(yàn)首先以30％Ⅲ度燒傷大鼠為動(dòng)物模型，較為系統(tǒng)地觀察了嚴(yán)重?zé)齻蠊撬琛熬藓思?xì)胞被噬現(xiàn)象”；利用在體實(shí)驗(yàn)觀察了嚴(yán)重?zé)齻笳{(diào)控巨核細(xì)胞增殖、分化和不同成熟階段生長(zhǎng)因子的表達(dá)變化；同時(shí)利用體外T
4、rallswell穿膜等實(shí)驗(yàn)觀察了正常和嚴(yán)重?zé)齻蟠笫蠊撬杈藓思?xì)胞與中性粒細(xì)胞的遷移、游走情況，重點(diǎn)觀察巨核細(xì)胞特異性分泌、對(duì)中性粒細(xì)胞又有特異性趨化作用的細(xì)胞因子一中性粒細(xì)胞激活肽2(N舳．2)‘的變化；旨在闡明嚴(yán)重創(chuàng)傷后“骨髓巨核被噬現(xiàn)象”可能發(fā)生的機(jī)制。主要的方法和結(jié)果如下：6第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文(一)骨髓組織切片觀察：正常大鼠骨髓中有大量有核細(xì)胞，可見處于不同成熟期的巨核細(xì)胞，很少見巨核細(xì)胞被噬食；30％III度燒傷后24h骨髓腔充血明顯，巨核細(xì)胞退變，部分巨核細(xì)胞胞漿溶解；退變的巨核
5、細(xì)胞被中性粒細(xì)胞包繞、食噬，呈“蟲蝕樣”改變。采用NAP．2和CD．15分別標(biāo)記巨核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，可見深紫色的中性粒細(xì)胞在紅色的巨核細(xì)胞體內(nèi)。(二)燒傷后調(diào)控巨核細(xì)胞增殖、分化和成熟的細(xì)胞因子表達(dá)變化PF一4和NAP．2是巨核細(xì)胞分泌的特異性蛋白。正常組PF一4主要分布在較為幼稚的巨核細(xì)胞胞漿，成熟巨核細(xì)胞表達(dá)量較低；燒傷后24hPF一4在巨核細(xì)胞的表達(dá)明顯減弱；燒傷后15dPF．4在巨核細(xì)胞的胞漿表達(dá)增加，明顯高于燒傷后24h組，但仍低于正常組。NAP．2在正常巨核細(xì)胞胞漿、胞膜表達(dá)均為陽性
6、；燒傷24hNAP．2表達(dá)明顯減弱；燒傷后15d表達(dá)增加，強(qiáng)于燒傷后24h組，但弱于正常組的表達(dá)。TPO和IL．3是巨核細(xì)胞增殖和分化的正調(diào)節(jié)因子，TGF—B1和P．seletin是其負(fù)調(diào)控因子。TPO主要分布在較為正常成熟的巨核細(xì)胞胞漿和胞膜；燒傷后24hTPO在巨核細(xì)胞的表達(dá)降低；．燒傷后15dTPO表達(dá)仍低于正常組和燒傷后24h組。燒傷后24hIL一3在骨髓細(xì)胞的表達(dá)與正常對(duì)照組相比降低，15d時(shí)仍較低。正常巨核細(xì)胞胞漿和胞膜均表達(dá)TGF．Bl；燒傷后24h在巨核細(xì)胞的表達(dá)略有下降，無統(tǒng)計(jì)學(xué)
7、差異；燒傷后15d表達(dá)減弱，與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P．seletin在正常巨核細(xì)胞胞漿和胞膜均表達(dá)；燒傷后24h表達(dá)下降；燒傷后15d表達(dá)弱于正常組和24h組。GATA．1和NF．E2分別參與了巨核細(xì)胞早期增殖和晚期分化成熟。GATA．1在正常骨髓幼稚和成熟巨核細(xì)胞的胞漿和胞核表達(dá)；燒傷后24hGATA．1在較幼稚的巨核細(xì)胞表達(dá)明顯減弱，而在體積較大形態(tài)易于辨認(rèn)的成熟巨核細(xì)胞表達(dá)陽性，主要分布在胞漿和胞核；燒傷后15dGATA一1在幼稚和成熟巨核細(xì)胞的表達(dá)均減弱。與正常對(duì)照組相比，燒傷后24h
8、NF—E2表達(dá)減弱，燒傷后15d表達(dá)仍弱于前兩者。(三)燒傷后巨核細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變掃描電鏡觀察：正常大鼠骨髓巨核細(xì)胞呈圓形，表面光滑，燒傷后24h巨核細(xì)胞呈不規(guī)則形狀，表面不平整，呈現(xiàn)出“珊瑚樣”改變。透射電鏡觀察：正常大鼠骨髓巨核細(xì)胞胞漿有豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和成熟顆粒，胞核呈分葉，染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀彌散分布，燒傷后24h巨核細(xì)胞胞漿細(xì)胞器減少，有局灶樣壞死，并可見中性粒細(xì)胞伸出“偽足”進(jìn)入到巨核細(xì)胞的胞漿中，核皺縮，染色質(zhì)濃縮邊集。7第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文(四)燒傷后中性粒細(xì)
