大鼠脊髓缺血再灌注損傷后自噬表達(dá)及作用的實(shí)驗(yàn)研究

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2、完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書(shū)館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所(含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤(pán)版)電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名：盈蘭：日導(dǎo)師簽名：大鼠

3、脊髓缺血再灌注損傷后自噬表達(dá)和作用的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要第一部分大鼠脊髓缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)目的；建立大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型，觀察不同缺血時(shí)間對(duì)脊髓缺血再灌注損傷后病理組織學(xué)和神經(jīng)功能評(píng)分的影響。方法：構(gòu)建大鼠胸主動(dòng)脈球囊阻斷復(fù)合體循環(huán)低血壓(MAP=40mmHg)脊髓缺血再灌注模型，按不同的阻斷時(shí)間隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血8min組、10min組和12min組，評(píng)定再灌注24h和48h后神經(jīng)功能；觀察再灌注48h后脊髓形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果：再灌注48h后，缺血8min、10min$112min組出現(xiàn)截癱率分

4、別為60％、100％和100％，各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。再灌注48h后，脊髓組織出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞腫脹、壞死等改變，且隨阻斷時(shí)間的延長(zhǎng)，損傷程度逐漸加重。結(jié)論成功建立大鼠胸主動(dòng)脈球囊阻斷復(fù)合體循環(huán)低血壓脊髓缺血再灌注模型。脊髓缺血10min是模型建立的最佳時(shí)間。關(guān)鍵詞：脊髓損傷，動(dòng)物模型，神經(jīng)功能評(píng)分，組織病理學(xué)第二部分細(xì)胞自噬及其相關(guān)蛋白Beclin．1，LC3和P62在大鼠脊髓缺血再灌注損傷組織中的表達(dá)目的：觀察大鼠脊髓缺血再灌注損傷后損傷區(qū)細(xì)胞自噬是否存在，比較不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞自噬的表達(dá)情況。方法：將

5、大鼠隨機(jī)分為兩組，假手術(shù)組和缺血組，缺血組再分五個(gè)時(shí)間點(diǎn)：3H，6H，12H，24H，48H。損傷組按照第一部分的方法制作脊髓缺血再灌注損傷模型，假手術(shù)組只置入導(dǎo)管而不打開(kāi)球囊損傷脊髓，按照上述時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物后，用透射電鏡觀察細(xì)胞白噬，用熒光雙染法檢測(cè)LC3及Beclinl在各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)和在各類(lèi)脊髓組織細(xì)胞中的分布，Westernblot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Beclinl，LC3和P62的表達(dá)情況。結(jié)果：透射電鏡發(fā)現(xiàn)脊髓損傷后的各個(gè)時(shí)問(wèn)點(diǎn)，在損傷的神經(jīng)元細(xì)胞中可以發(fā)現(xiàn)自噬囊體和自噬溶酶體明顯增加，脊髓損傷后3h開(kāi)始，

6、細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclinl和LC3表達(dá)即較對(duì)照組明顯上調(diào)，并且隨著時(shí)間持續(xù)升高，在傷后24h時(shí)達(dá)中文摘要大鼠脊髓缺血再灌注損傷后自噬表達(dá)和作用的實(shí)驗(yàn)研究到高峰，傷后48h有回落，但仍高于基礎(chǔ)值，而自噬相關(guān)蛋[芻P62表達(dá)下調(diào)表達(dá)，和Beclin1，LC3反相同步。缺血再灌注組Beclin1和LC3IgE]性細(xì)胞數(shù)在各時(shí)間點(diǎn)明顯高于假手術(shù)組(p<0,05)，趨勢(shì)與蛋白變化相符。脊髓神經(jīng)元細(xì)胞，膠質(zhì)細(xì)胞，小膠質(zhì)細(xì)胞中均有Beclin1和LC3表達(dá)。結(jié)論：1、脊髓缺血再灌注損傷中3H自噬表達(dá)明顯上調(diào)，24H至IJ達(dá)高峰

7、，48H下降。神經(jīng)元細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞均可見(jiàn)自噬表達(dá)。自噬參與脊髓缺血再灌注損傷過(guò)程。關(guān)鍵詞：脊髓缺血再灌注損傷，自噬，Beclinl，LC3，P62第三部分自噬抑制劑3一MA對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響目的：通過(guò)鞘內(nèi)注射自噬抑制劑3．MA，觀察自噬被抑制后對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響。方法：將大鼠隨機(jī)分成三組：假手術(shù)組，單純?nèi)毖獡p傷組，3-MA組，每組分為傷后3H，12H，24H，48H各4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，神經(jīng)功能評(píng)分評(píng)價(jià)24h和48hdx時(shí)后雙下肢神經(jīng)功能，脊髓前角神經(jīng)元計(jì)數(shù)，Wester

8、nblot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Beclinl，LC3和P62檢測(cè)各組各時(shí)間點(diǎn)蛋白表達(dá)的變化，組織熒光免疫法檢測(cè)各組Beclin1和LC3陽(yáng)性細(xì)胞變化。結(jié)果：24H和48H后3．MA干預(yù)組較單純?nèi)毖M神經(jīng)功能評(píng)分顯著改善(尸<0．05)，在觀測(cè)的的4個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，3-MA治療組脊髓前角神經(jīng)元數(shù)明顯多于單純?nèi)毖M，Beclinl和LC3的蛋白上調(diào)表達(dá)和