mp1基因在遼寧絨山羊皮膚的表達研究

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3、文中除特別加Ｗ標(biāo)注和的地方外■不包含他人和其他機構(gòu)己經(jīng)撰寫或發(fā)表巧的研究成果，其他同志的研充成果對本人的．．啟示和所提供的幫助，均己在論文中做了明確的聲明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：學(xué)位論文版權(quán)的使用授權(quán)書權(quán)保本學(xué)位論文作者完全了解迂寧師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，及學(xué)校有遼留并向國家有關(guān)部口或機構(gòu)送交復(fù)印件或磁盤，允許論文被查閱和借閱。本文授權(quán)寧師范大學(xué)，可將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫并進行檢索，可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，并且本人電芋文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文一的保密內(nèi)容相致。的學(xué)位論文在解密后使用

4、本授權(quán)書。．學(xué)位論文作者簽名：賣應(yīng)片傳指導(dǎo)教師簽名：■簽名日期：含年月日／＾遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要遼寧絨山羊是我國特有的品種，并且是禁止基因外流的寶貴資源，其羊絨產(chǎn)量居全國首位，因此，研究與羊絨相關(guān)基因的功能就更具實際生產(chǎn)意義。前期，我們實驗室通過建庫、測通獲得了遼寧絨山羊的新基因MP1（MEKPartner1）的全長序列，首先對MP1基因進行生物信息學(xué)分析，檢測其核酸及氨基酸的同源性，建立進化樹等。然后通過RT-PCR檢測MP1基因在各組織中的表達，再利用qPCR方法檢測其在毛囊生長的不同時期的初、次級毛囊中的表達含量，最后對絨山羊興盛期皮膚進行原位雜交并對

5、其進行表達位點分析。為進一步研究MP1基因是否與羊絨細(xì)度之間存在某種關(guān)系，利用本實驗室已有的Noggin基因RNA干擾的慢病毒，感染遼寧絨山羊皮膚細(xì)胞后，再利用qPCR檢測其對MP1基因表達的影響，為培育出具有優(yōu)良經(jīng)濟性狀的絨山羊提供一定的分子理論基礎(chǔ)。結(jié)果如下：（1）MP1基因編碼的蛋白質(zhì)包含124個氨基酸，分子量為13.64KD，是一個疏水性蛋白。MP1含有α螺旋結(jié)構(gòu)（25.81%）、延伸鏈結(jié)構(gòu)（33.87％）和無規(guī)卷曲（40.32％）。無跨膜結(jié)構(gòu)域，無信號肽。MPl的氨基酸序列包含一個保守的MAPKKl-Int結(jié)構(gòu)域，含有有3個可能成為磷酸化位點的Ser。RT-PCR檢測結(jié)果顯示

6、：僅在皮膚、心臟中MP1基因有表達，而在肝、腎、肺、脾中未發(fā)現(xiàn)其表達。qPCR檢測毛囊在興盛期時，MP1基因在次級毛囊的表達量為初級毛囊的1.65倍，退行期MP1基因在次級毛囊的表達量為初級毛囊的3.25倍。原位雜交分析發(fā)現(xiàn)：MP1在內(nèi)根鞘上有明顯的表達，在毛干、外根鞘以及毛囊乳突中無表達。（2）成功構(gòu)建出Noggin基因RNAi的慢病毒載體，Noggin基因被干擾后，qPCR檢測發(fā)現(xiàn)MP1基因起負(fù)調(diào)控作用，MP1基因的相對表達量出現(xiàn)上調(diào)的趨勢。由以上結(jié)果可以得出以下結(jié)論：（1）通過對MP1基因在生物信息學(xué)，熒光定量以及原位雜交等方面的研究，推測MP1對絨山羊皮膚細(xì)胞的生長發(fā)育產(chǎn)生影響

7、，可能與毛囊的生成及再上皮化過程有關(guān)，且并具有能夠使羊毛變細(xì)的作用。（2）推測MP1基因可能存在于Noggin基因表達調(diào)控的下游，并通過其與Noggin基因之間存在的某種關(guān)系，實現(xiàn)BMP-MAPK途徑共同作用來調(diào)節(jié)絨山羊的表皮及毛囊的的穩(wěn)態(tài)和發(fā)育過程。關(guān)鍵詞：遼寧絨山羊；MP1；熒光定量；原位雜交；RNAi；慢病毒IMP1基因在遼寧絨山羊皮膚的表達研究StudyontheexpressionofMP1inLiaoningCashmereGoat