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《小麥抗葉銹基因Lr37的ISSR分子標記》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、河北農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文小麥抗葉銹基因Lr37的ISSR分子標記姓名：張立榮申請學位級別：碩士專業(yè)：植物病理學指導教師：劉大群2002.6.1摘要本研究利用ISSR(內(nèi)部簡單重復序Y0)技術(shù)對Thatcher及22個以Thatcher為輪回親本的小麥抗葉銹病近等基因系(NILs)進行分析，結(jié)果如下：／1．建立了一套適合本研究的小麥ISSR分析的晟優(yōu)化反應(yīng)體系及反戍程序。f通、過以小麥基因組DNA為模扳，對ISSR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序中的一些重要參數(shù)進行摸索和優(yōu)化試驗．本研究所用反應(yīng)體系為：25。m反應(yīng)體系中含有10mMKCl、8mM(NHO
2、2SO‘、10mM"Iris．HCI(pH9．0)、NP-40、2．0ramMg”、150t2MdNTP、200nM引物、60ng模板DNA、2．0UTaqDNA聚合酶。反應(yīng)程序為第一個循環(huán)基因組DNA經(jīng)94"(2預(yù)變性3min：40個循環(huán)為94"C變性30sec．48"(3遨火60sect72"C延、伸2rain：最后一個循環(huán)完成后．在72"C下延伸7min。斗／2．通過對Thatcher及小麥抗葉銹病近等基因系的ISSR分析找到一個與￡一7基／因連鎖的ISSR標記。(研究采用100個ISSR引物對小麥抗葉銹近等基因系進行了分、析，其中
3、絕大多數(shù)引物能擴增出清晰可辨的條帶．經(jīng)過多次重復發(fā)現(xiàn)有兩個引物UBCSl2和UBC848在小麥抗葉銹基因Lr37近等基因系問表現(xiàn)多態(tài)性。當用這兩個引物對含Lr37基因的抗病材料VPMl+Trident、Hyak、Madsen及其它不含Lr37基因的感病材料進行檢測時．標記UBC812．1200可以從三個含Lr37基因的抗病材料中檢測到一條1200bp的多態(tài)性帶。而在其它感病材料中，沒有這條1200bp的條帶，初步表明標記UBC812．1200與Lr37基因連鎖。而標記UBC848—700不能將不同遺傳背景中的Lr37基因檢測出來，表明UB
4、C848．700的特異性羞．同時說明標記、UBC848．700的結(jié)合位點與Lr37基因不連鎖。、}，r3．偽了進一步確定ISSR標記UBC812-1200與Lr37基因連鎖的緊密程度，我＼～—————————一們種植ThatcherxLr37／6*Thatcher雜交的F2代小麥128株．接種LrJ7的無毒菌株，＼，抗感比為3：1刀提取其單株小麥的DNA，再以引物UBC812進行擴增，發(fā)現(xiàn)所有的／抗病單株均能擴增出1200bp的特異性條帶，麗所有的感病單株沒有此條帶。表明標記UBCSl2—1200與Lr37基岡共分離。關(guān)鍵詞：小麥：抗nf
5、‘銹基岡：￡，球ISSR分子標記f獨創(chuàng)性聲明本人聲明所里交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果．據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外。論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得j!l絲硅生莖i釜或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料．與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名：鞏電系簽字日期：v。}年‘月≯p日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解!豸塑巫查盞有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印
6、件和磁盤，允許論文被查閱和借閱．本人授權(quán)i五苧!g趨±f壘可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文．(保密的學位論文在解密后適用本授權(quán)書)學位論文作者簽名：鳥告矽揚簽字日期：1們J年b月j7日學位論文作者畢業(yè)后去向工作單位：通訊地址：別譴名．動氣節(jié)簽字日期：j?！ぁ勰?。月7’7日電話郵編!：耋苧!!：塑苧墮!：!：塑!!!!坌三塑皇L———————————一文獻綜述1．SSR、ISSR分子標記技術(shù)及其在植物中的應(yīng)用近年來．分子標記的研究與利用得到了迅速的發(fā)展。對不同分子標記
7、技術(shù)的選用，主要取決于應(yīng)用目的和研究對象，理想的分子標記應(yīng)既簡單又可靠。目前應(yīng)用于植物中的DNA分子標記主要有限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)、隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)、擴增酶切片段長度多態(tài)性(AFLP)、序列特異擴增區(qū)域(SCAR)、數(shù)量可變串聯(lián)重復(VNTR)、簡單序列重復K度多態(tài)性(SSR)和簡單序列重復區(qū)間擴增多態(tài)性(ISSR)等。SSR、ISSR分子標記技術(shù)以其高效可靠性正越來越受到人們的重視．1．1SSR、ISSR分子標記技術(shù)的原理和特點1．1．1原理在真核生物基因組中均存在著由1．4個堿基對組成的簡單重復序列，又稱之
8、為微衛(wèi)星(Microsatellite)【23】，如(GA)n、(AC)n、(GAA)n等。同一類微衛(wèi)星DNA可分布在整個基因組不同位置上。由于其重復次數(shù)不同或重復程度不完全而形成每個座位的多
