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1、第3卷第5期現(xiàn)代農(nóng)藥Vol.3No.52004年10月ModernAgrochemicalsOct.2004正交設(shè)計法優(yōu)化Bt發(fā)酵培養(yǎng)基高鶴永弓愛君曲冬梅邱麗娜（北京科技大學(xué)應(yīng)用科學(xué)學(xué)院北京100083）摘要采用正交實驗方法，進行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基篩選試驗來優(yōu)化蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，通過測量發(fā)酵液吸光度值來確定不同農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基成分對蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵的影響，從而使培養(yǎng)基優(yōu)化過程簡單易行。實驗結(jié)果表明，不同培養(yǎng)基成分配比對發(fā)酵效果影響差別很大，試驗所得的最佳培養(yǎng)基組合為：玉米粉2.0%、豆餅粉3.5%、魚粉2.0%、花生餅粉
2、2.0%、淀粉1.0%、K2HPO40.3%、CaCO30.3%。關(guān)鍵詞正交實驗蘇云金芽孢桿菌培養(yǎng)基篩選蘇云金桿菌殺蟲劑（Bt）是聯(lián)合國糧農(nóng)組織和司）、K2HPO4（北京紅星化工廠）、CaCO3（北京化世界衛(wèi)生組織推薦、目前在世界上生產(chǎn)和使用量最學(xué)試劑公司）。大的生物殺蟲劑。與化學(xué)殺蟲劑相比，其主要特點1.3儀器和設(shè)備是：對人畜及其它有益生物無害，無環(huán)境污染，害RH型光照恒溫振蕩器，752C可見-紫外分光光蟲不易對其產(chǎn)生抗藥性，是具有廣闊應(yīng)用前景的生度計，SW-CJ-FD型凈化工作臺，JY92型超聲波細[1]物農(nóng)藥。蘇云金芽
3、孢桿菌對營養(yǎng)物質(zhì)的要求不高，胞粉碎機，280A型高壓滅菌鍋。在含氮0.075%~0.225%，含糖0.1%~1.5%和糖氮比1.4目標(biāo)產(chǎn)物濃度和吸光度的關(guān)系[2]0.44～20.0的環(huán)境下就能很好的生長。國際上生目標(biāo)產(chǎn)物主要成分是芽孢和晶體蛋白，通過連產(chǎn)此菌的主要原料為酵母浸出液、大豆粉、淀粉、續(xù)波長掃描在278nm處吸光度最大，因此選擇在葡萄糖等。雖然由此生產(chǎn)的Bt成品效價高，但存在278nm波長處測吸光度。取固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌懸著原料成本高的問題，造成糧食產(chǎn)品的浪費，從而液，超聲波破碎，使芽孢和伴孢晶體得到完全釋放，失去
4、了與化學(xué)農(nóng)藥的競爭力。為了便于工業(yè)化大規(guī)制成孢晶懸液，量取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、模發(fā)酵生產(chǎn)，降低生產(chǎn)成本，本文利用一些生產(chǎn)成2.5mL共5種體積的孢晶懸液都稀釋到100mL，[3]本低廉的農(nóng)副產(chǎn)品作為發(fā)酵培養(yǎng)基的主要碳氮源，在278nm波長處測得的吸光度和孢晶懸液濃度的采用正交設(shè)計試驗結(jié)合測定發(fā)酵液吸光度，確定了關(guān)系如圖1。HD-1菌株的最佳產(chǎn)毒發(fā)酵培養(yǎng)基組分。12y=0.3552xR=0.9990.81材料與方法吸光度0.61.1供試菌種0.4蘇云金芽孢桿菌HD-10.21.2培養(yǎng)基原料0-1LB
5、培養(yǎng)基(質(zhì)量濃度)：胰蛋白胨10g·L(北京00.511.522.53-1菌量(mL)雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠)、酵母膏5g·L(北京雙-1旋微生物培養(yǎng)基制品廠)、NaCl10g·L(北京益利化圖1孢晶濃度和吸光度的關(guān)系學(xué)品公司)、瓊脂（北京化學(xué)試劑公司）pH＝7.2。由圖1可知孢晶懸液的濃度與其吸光度成線性篩選培養(yǎng)基：玉米粉、豆餅粉、花生餅粉（購于市關(guān)系，因此可以用吸光度來標(biāo)定孢晶懸液的量，即場）、魚粉（北京飼料公司）、淀粉（北京市恒利公發(fā)酵效果。收稿日期：2004-05-19；修回日期：2004-08-30作者簡介：高鶴永
6、（1976—），男，北京科技大學(xué)碩士研究生，從事生物農(nóng)藥發(fā)酵的研究。12現(xiàn)代農(nóng)藥第3卷第5期1.5培養(yǎng)基篩選方法表3正交試驗方差分析根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物孢晶懸液濃度和吸光度值成線性方差分析平方和自由度F值備注的關(guān)系，把發(fā)酵液的吸光度作為優(yōu)化培養(yǎng)基的依據(jù)。A(玉米粉)0.06221.831[4]B(豆餅粉)0.05421.595根據(jù)文獻中的試驗方法設(shè)置適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基組合，C(魚粉)0.00620.177選擇玉米粉、豆餅粉、魚粉、花生餅粉、淀粉、D(花生餅粉)0.05921.743KHPO、CaCO7個因素，每個因素選高、中、低F0.1(
7、2,4)＝1.58243E（淀粉）0.01720.502[5]73個濃度進行正交試驗設(shè)計。應(yīng)用L18(3)正交表F(K2HPO4)0.03120.916對各組分進行優(yōu)化試驗，考察不同培養(yǎng)基組分對發(fā)G（CaCO3）0.00820.236酵液吸光度的影響。各因素水平見表1。誤差e0.2414表1正交試驗水平（%）2結(jié)果與討論水平玉米粉豆餅粉魚粉花生餅粉淀粉K2HPO4CaCO3從表2和表3方差分析可以看出，玉米粉、豆123.01.54.02.00.50.521.52.01.02.01.00.30.3餅粉和花生餅粉的F值分別為1.
8、831、1.595和1.743，311.00.51.00.50.10.1說明玉米粉、豆餅粉和花生餅粉對發(fā)酵的影響比較1.6搖瓶試驗顯著，而魚粉、淀粉、K2HPO4和CaCO3對發(fā)酵液按正交試驗設(shè)計，分別配制不同培養(yǎng)基，每種吸光度的影響不大，以魚粉的影響最小。影響發(fā)酵培養(yǎng)基取50mL2份（1
