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《均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化咪唑立賓發(fā)酵培養(yǎng)基配方.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化咪U坐立賓發(fā)酵培養(yǎng)基配方作者：關(guān)亞鵬婁忻張莉劉靚張玉蓮劉靜【摘要】本文采用均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)方法對(duì)咪哇立賓的發(fā)酵培養(yǎng)基配方進(jìn)行優(yōu)化，考察淀粉、鉄質(zhì)粉、黃豆餅粉和葡萄糖對(duì)其發(fā)酵效價(jià)和菌體牛長(zhǎng)量的影響，得到了四個(gè)因素的優(yōu)化配比（淀粉1?8%,就質(zhì)粉1.5%,黃豆餅粉2.5%,葡萄糖0.6%）,發(fā)酵效價(jià)比對(duì)照培養(yǎng)基提高約21.3%o【關(guān)鍵詞】咪醴立賓；均勻設(shè)計(jì)法；發(fā)酵培養(yǎng)基；優(yōu)化ABSTRACTUniformdesignmethodwasusedtooptimizethefermentationmediumofmizori
2、bine?Theeffectsofstarch,corngluten,soybeanmealandglucoseo門七讓&!$8口￡1卩8（｝血（101丫（2&1詁*01110100伽；701413［備怕［0studied?Theoptimummediumcontains1.8%starch,1.5%corngluten,2.5%soybeanmealand0.6%glucose?Undertheoptimumcondition,thetitersofmizoribinewas21.3%higherthanthatinth
3、econtrolmedium.KEYWORDSMizoribine;Uniforoidesign;Fermentationmedium;0ptimization咪哩立賓（mizoribine,MZR）是1971年由日本科學(xué)家從Eupenicillumbrefeldianum的培養(yǎng)液中分離得到的一種咪卩坐類核甘，其化學(xué)名為5輕基10D咲喃糖基1H咪哩4竣酰胺,屬新型免疫抑制劑之一［1,2］,臨床上主要用于腎臟移植術(shù)后排異反應(yīng)的預(yù)防，治療狼瘡性腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征及系統(tǒng)性紅斑狼瘡等［3?5］。由于從土壤中篩選得到的其
4、野生型產(chǎn)生菌的發(fā)酵效價(jià)比較低，不具備產(chǎn)業(yè)化的能力，所以近年來(lái)對(duì)其產(chǎn)生菌的選育和培養(yǎng)基優(yōu)化的研究工作一直在進(jìn)行。均勻設(shè)計(jì)法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于科研和生產(chǎn)的各個(gè)方而［6,7］,它在多因素、多水平的試驗(yàn)設(shè)計(jì)場(chǎng)合比正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)具有更大的優(yōu)勢(shì)［8］。本文以均勻設(shè)計(jì)方法為基礎(chǔ)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的一株咪卩坐立賓產(chǎn)生菌的發(fā)酵培養(yǎng)基配方進(jìn)行優(yōu)化，得到了四個(gè)主耍因素的最優(yōu)配比，優(yōu)化后配方的發(fā)酵效價(jià)比對(duì)照培養(yǎng)基提高21.3%o1材料和方法1.1菌種正青霉MZ50（本實(shí)驗(yàn)室編號(hào)）,實(shí)驗(yàn)室保存。1.2培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基PDA,瓊脂，蒸幗水配制。種子培養(yǎng)基淀粉，葡
5、萄糖，黃豆餅粉，酵母粉，氯化鈉，硫酸鎂,碳酸鈣,pH7.0o發(fā)酵培養(yǎng)基(對(duì)照)淀粉，鉄質(zhì)粉，黃豆餅粉，葡萄糖，pH自然。1?3搖瓶培養(yǎng)單菌落轉(zhuǎn)接丁斜面，待長(zhǎng)出豐滿抱子后接種于種子培養(yǎng)基中，26°C下培養(yǎng)44?48h,然后以2.5%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，26°C搖床培養(yǎng)4d,放瓶測(cè)定效價(jià)。1?4測(cè)定方法(1)菌體生長(zhǎng)量(packedmycelialvolume,pmv,%)取發(fā)酵液10ml,3000r/min離心15min,下層菌絲體體積占發(fā)酵液體積的百分比即菌體生長(zhǎng)量。(2)發(fā)酵效價(jià)(u/ml)HPLC法。1?5實(shí)驗(yàn)設(shè)
6、計(jì)設(shè)淀粉、鉄質(zhì)粉、黃豆餅粉、葡萄糖四個(gè)因素分別為自變量XI、X2、X3和X4,相對(duì)發(fā)酵效價(jià)和菌體生長(zhǎng)量分別為因變量Y1和Y2,各因素及水平列表1o根據(jù)均勻設(shè)計(jì)V4.0版軟件提供的模型，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。2結(jié)果和分析2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)上述設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果列表2。利用均勻設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用最優(yōu)回歸子集法得到相對(duì)發(fā)酵效價(jià)(Y1)對(duì)4個(gè)因素淀粉(XI)、鉄質(zhì)粉(X2)、黃豆餅粉(X3)、葡萄糖(X4)的回歸方程為：Y1二722.30+866.98X4+62.40X1X3-48.82X2X3-841.34X24R2二0.9997
7、采用口選變量法分析得到菌體生長(zhǎng)量(Y2)對(duì)鉄質(zhì)粉(X2)和葡萄糖(X4)的冋歸方程為：Y2二55.91-15.99X4+13.20X2X4+26.95X2X4R2=0.9997對(duì)回歸方程的各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表3和表4,得到的最優(yōu)解列表5。表1U6(64)實(shí)驗(yàn)因索及其水平表2U6(64)實(shí)驗(yàn)結(jié)果以上發(fā)酵效價(jià)為相對(duì)值，即設(shè)對(duì)照組的發(fā)酵效價(jià)為100,發(fā)酵效價(jià)為三次平均值。表3Y1回歸方程的方差分析表4Y2回歸方程的方差分析表5最優(yōu)解由回歸方程的方差分析表可見(jiàn)，Y1回歸方程的卩值大于F0.05(4,1),Y2冋歸方程的F值
8、大于F0.05(3,2),相關(guān)系數(shù)R2值和p值都很合理，說(shuō)明方程擬合很好，方程有極其顯著的意義，圖1?4為各因素對(duì)發(fā)酵效價(jià)和菌體生長(zhǎng)量的影響趨勢(shì)圖。2.2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)對(duì)表5得到的綜合最優(yōu)解條件進(jìn)行三批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，測(cè)定發(fā)酵效價(jià)和菌體生長(zhǎng)量，每批實(shí)驗(yàn)取3個(gè)樣品平均值，結(jié)果見(jiàn)表6。經(jīng)驗(yàn)證，在表6所列的
