豬瘟疫苗制備

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1、豬瘟疫苗制備楊興輝11級動(dòng)物檢疫3班11031080881.豬瘟簡介豬瘟（HogCholeraVaccines，HCV）是一種急性、熱性和高度接觸傳染的病毒性傳染病。其發(fā)病特征為發(fā)病急，高熱稽留和細(xì)小血管壁變性，引起全身泛發(fā)性小點(diǎn)出血，脾梗死。是一種對豬危害性極大的傳染病，被國際獸疫局列為A類動(dòng)物傳染病[1]。在許多國家和地區(qū)，傳統(tǒng)疫苗接種是控制豬瘟的重要手段。2.豬瘟疫苗的發(fā)展?fàn)顩r1903年DeSehweinitz和Dorset首次證明CSFV是一種濾過性病毒。1908年匈牙利HutyraKoves制成豬瘟高免血清后，人們一直用高免血清-血毒同時(shí)

2、肌注來免疫豬群。但由于高免血清昂貴，獲取困難，加之血毒有散毒的危險(xiǎn)，因此各國學(xué)者在以后的60年間相繼研制出許多滅活疫苗。20世紀(jì)70年代，在佐劑和病毒培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展的推動(dòng)下，人們在研制出較為理想的滅活疫苗的同時(shí)，還研制出安全有效的豬瘟弱毒疫苗，并廣泛應(yīng)用于臨床。1954年我國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所周泰沖等研究者，相繼用4株豬瘟病毒(hogcholeravirus，HCV)分別誘發(fā)家兔感染，經(jīng)過一系列的試驗(yàn)，終于選育出1株能夠適應(yīng)家兔的HCV，經(jīng)兔體連續(xù)傳代適應(yīng)后發(fā)生變異，減弱對豬的致病力，卻仍保持很強(qiáng)的免疫原性。用其制備的疫苗自1956年開始在全國推廣應(yīng)用，

3、對控制我國豬瘟（HC）的流行起到了決定性作用，并在國外廣泛應(yīng)用[2]。1956年全國推廣兔化弱毒疫苗制成濕苗。1958年研制成功凍干疫苗。1965年，用豬瘟兔化弱毒疫苗接種牛，并感染牛的脾臟和淋巴結(jié)，可用來制造牛體反應(yīng)苗。1974年用乳豬腎細(xì)胞培養(yǎng)豬瘟兔化弱毒獲得成功，因而可利用大瓶旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)豬瘟兔化弱毒，制作凍干苗，對豬有效，但用豬腎同源細(xì)胞生產(chǎn)疫苗有帶豬瘟強(qiáng)毒的危險(xiǎn)性。1980年研制成功綿羊腎細(xì)胞苗。1982年和1985年又分別研制成功了奶山羊腎細(xì)胞苗和犢牛睪丸細(xì)胞苗。這些異源苗的研制不但提高了產(chǎn)量，而且在質(zhì)量上也有所提高[3]。3.我國豬瘟疫苗

4、使用情況我國目前市場上使用的豬瘟疫苗主要有4種，即豬瘟、豬肺疫、豬丹毒三聯(lián)苗，豬瘟細(xì)胞苗，豬瘟乳兔脾淋組織苗，豬瘟成兔脾淋組織苗等，其中免疫效果較好的有2種，即豬瘟活疫苗（II）———細(xì)胞苗、豬瘟活疫苗I———組織苗（成兔脾淋苗）。這2種疫苗現(xiàn)在已經(jīng)是政府采購疫苗,被列入強(qiáng)免名單。4.豬瘟活疫苗制備工藝流程1.毒種1.1制造本品用的毒種為豬瘟兔化弱毒株；校檢用強(qiáng)毒為豬瘟病毒石門系。1.2毒種標(biāo)準(zhǔn)豬瘟兔化弱毒株通過兔體繼代，采集定型熱反應(yīng)兔的脾臟作毒種。脾毒應(yīng)符合以下標(biāo)準(zhǔn)：（1）對家兔的感染性：將毒種用滅菌生理鹽水作50倍稀釋，耳靜脈接種家兔4只，每

5、只1ml。接種后測溫觀察96小時(shí)，僅使家兔產(chǎn)生熱反應(yīng)，不致死家兔。（2）最小感染量：脾毒對家兔的最小感染量≤10-5/ml。（3）安全性：用滅菌生理鹽水作10倍稀釋，肌肉注射健康易感豬4頭，每頭5ml。接種后每日上、下午各測體溫、觀察一次，觀察21日。體溫、精神、食欲應(yīng)正常。（4）免疫原性：脾毒對豬的最小免疫量為≤10-5/ml。（5）純凈：應(yīng)無細(xì)菌、霉菌、支原體及外源病毒污染。（6）特異性：將毒種（疫苗）用滅菌生理鹽水稀釋成每1ml含有100個(gè)兔的最小感染量的病毒懸液，與等量的抗豬瘟病毒特異性血清充分混合，置10~15℃中和1小時(shí)，其間振搖2~3

6、次。同時(shí)設(shè)立陽性對照（病毒對照）和陰性對照組（生理鹽水）。中和結(jié)束后，分別接種家兔2只，每兔耳靜脈注射1ml，觀察體溫。除陽性對照組應(yīng)出現(xiàn)熱反應(yīng)外，其余兩組在接種后120小時(shí)內(nèi)不引起熱反應(yīng)。（7）基礎(chǔ)種子代數(shù)：為478~490代。（8）毒種保存-70℃保存期為10年；在-30℃保存期為5年。2.生產(chǎn)用毒種制備2.1毒種繁殖2.1.1家兔的選擇選用營養(yǎng)良好，體重1.5~3kg家兔。購入家兔應(yīng)隔離飼養(yǎng)觀察30日以上。家兔接種前，至少應(yīng)測溫觀察3日，每日上、下午各測溫一次。選用體溫正常、體溫波動(dòng)不大的家兔。2.1.2接種將凍干毒種用滅菌生理鹽水制成50倍

7、稀釋的乳劑，每兔耳靜脈注射1ml。2.1.3測溫觀察家兔接種后，上、下午各測溫一次，24小時(shí)，每隔6小時(shí)測體溫一次。2.1.4熱型判定接種家兔的體溫分為四類：（1）定型熱反應(yīng)（++）潛伏期24~48小時(shí)，體溫上升呈明顯曲線，超過常溫1℃以上，至少有3個(gè)溫次，并稽留18~36小時(shí)。（2）輕熱反應(yīng)（+）潛伏期24~72小時(shí)，體溫上升有一定曲線，超過常溫0.5℃以上，至少有兩個(gè)溫次，稽留12~36小時(shí)。（3）可疑反應(yīng)（±）潛伏期不到24小時(shí)，或超過72小時(shí)，或超過72小時(shí)以上，體溫曲線起伏不定，或稽留不到12個(gè)小時(shí)，或稽留超過36小時(shí)而不下降。（4）無反

8、應(yīng)（－）體溫正常者。注：常溫家兔接種前3日所測體溫的平均溫度。潛伏期：由接種時(shí)算起，到體溫上升超過常溫0.5℃以上的間隔時(shí)