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《共聚焦激光掃描熒光顯微鏡-基本原理、應(yīng)用及樣本制備原則》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究中心CentreforStructuralBiologyWuhanUniversitySchoolofMedicine共聚焦激光掃描熒光顯微鏡—基本原理、應(yīng)用及樣本制備原則宋健生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101什么是共聚焦激光掃描熒光顯微鏡？共聚焦激光掃描熒光顯微鏡（ConfocalLaserScanningFluore
2、scenceMicroscope；LSFM）?以激光作為激發(fā)光源，采用光源針孔與檢測針孔共軛聚焦技術(shù)，對樣本進(jìn)行斷層掃描，以獲得高分辨率光學(xué)切片的熒光顯微鏡系統(tǒng)共聚焦系統(tǒng)?細(xì)胞CT生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101熒光和熒光顯微鏡一、熒光的基礎(chǔ)術(shù)語488nm520nm熒光物質(zhì)：某些物質(zhì)在特定波長范圍內(nèi)的光線照射下，可發(fā)出波長比照射光長的光線—熒光。受激發(fā)后能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)稱熒光物質(zhì)或熒光素激發(fā)光(EXCITATION)：
3、能特異性地激發(fā)某種熒光素的一定波長范圍內(nèi)的光線稱為該熒光素的激發(fā)光。激發(fā)/吸收光譜；吸收波峰(最大吸收波長)發(fā)射光(EMISSION):異硫氰酸熒光素(FITC)發(fā)射光譜；發(fā)射波峰(最大發(fā)射波長)熒光探針：能產(chǎn)生熒光的特異性生物染料（PI,Dapi)、標(biāo)有熒光素的特異性蛋白結(jié)合物（熒光抗體）自發(fā)熒光(AUTOFLUORESCENCE):組織或細(xì)胞中的某些成份受激發(fā)時可發(fā)出熒光—自發(fā)熒光。伊文斯藍(lán)、硼化氫鈉處理漂白(BLEACH)：熒光物質(zhì)受激發(fā)時，其發(fā)射熒光的能力逐漸下降并最終喪失—漂白。生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源共享、互助社區(qū)ww
4、w.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101熒光顯微鏡二、熒光顯微鏡術(shù)的基本原理高濾鏡被熒光光學(xué)被標(biāo)記壓分光紫外激發(fā)探針染成像結(jié)構(gòu)的藍(lán)汞色的生熒光光綠燈物樣本學(xué)圖像激發(fā)濾鏡：從光源中分濾出一定波長范圍的激發(fā)光。帶通濾色鏡(BP)：有寬、窄帶之分。如：BP450-490長、短通濾色鏡組合（LP+KP）：LP450+KP490488nm520nm雙色鏡：雙色分光鏡；反射短波長，透過長波長。阻斷濾鏡：多為長通濾色鏡；LP490450nm490nmFITC生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源
5、共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101共聚焦激光掃描熒光顯微鏡基本配置Confocalscananddetectorunit共聚焦掃描及檢測裝置ComputerMicroscope計算機熒光顯微鏡LaserandelectronicAnti-ControlvibrationUnittable激光光源及防震臺控制裝置LeicaTCSSP-2MPAOBSConfocalSystem生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs
6、生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101光電倍增管檢測針孔光源共聚焦裝置針孔X/Y掃描裝置熒光顯微鏡步進(jìn)聚焦電機物鏡Bio-RadLaserSharp系統(tǒng)操作，圖像處理3-D重建生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101光電倍增管共聚焦掃描顯微鏡光學(xué)原理檢測針孔光源針孔檢測針孔和光源針孔始終聚焦于同一點，使聚焦平面以外被激發(fā)的熒光不能進(jìn)入檢測針孔?高分辨率的光學(xué)切片光源分色鏡激光穿透性強，可對樣
7、本進(jìn)行一定深度光學(xué)斷層，獲得高標(biāo)準(zhǔn)的連續(xù)光學(xué)切片?實現(xiàn)三維重建物鏡樣本聚集平面生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101三維膠三維膠原基原基質(zhì)質(zhì)培養(yǎng)培養(yǎng)的的血血管平管平滑肌滑肌細(xì)細(xì)胞胞生物秀論壇——學(xué)術(shù)交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命
8、科學(xué)實驗中心www.bbioo.com/bio101共聚焦激光掃描熒光顯微鏡應(yīng)用領(lǐng)域只要目的結(jié)構(gòu)是用熒光探針標(biāo)記的，都可用共聚焦激光掃描熒光顯微鏡觀察。形態(tài)學(xué)研究：細(xì)胞凋亡、中樞神經(jīng)系的F聯(lián)系、腫瘤細(xì)胞分類……分子生物學(xué)
