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《共聚焦激光掃描熒光顯微鏡-基本原理、應用及樣本制備原則》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101武漢大學醫(yī)學院結(jié)構(gòu)生物學研究中心CentreforStructuralBiologyWuhanUniversitySchoolofMedicine共聚焦激光掃描熒光顯微鏡—基本原理、應用及樣本制備原則宋健生物秀論壇——學術交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101什么是共聚焦激光掃描熒光顯微鏡？共聚焦激光掃描熒光顯微鏡（ConfocalLaserScanningFluore
2、scenceMicroscope；LSFM）?以激光作為激發(fā)光源，采用光源針孔與檢測針孔共軛聚焦技術，對樣本進行斷層掃描，以獲得高分辨率光學切片的熒光顯微鏡系統(tǒng)共聚焦系統(tǒng)?細胞CT生物秀論壇——學術交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101熒光和熒光顯微鏡一、熒光的基礎術語488nm520nm熒光物質(zhì)：某些物質(zhì)在特定波長范圍內(nèi)的光線照射下，可發(fā)出波長比照射光長的光線—熒光。受激發(fā)后能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)稱熒光物質(zhì)或熒光素激發(fā)光(EXCITATION)：
3、能特異性地激發(fā)某種熒光素的一定波長范圍內(nèi)的光線稱為該熒光素的激發(fā)光。激發(fā)/吸收光譜；吸收波峰(最大吸收波長)發(fā)射光(EMISSION):異硫氰酸熒光素(FITC)發(fā)射光譜；發(fā)射波峰(最大發(fā)射波長)熒光探針：能產(chǎn)生熒光的特異性生物染料（PI,Dapi)、標有熒光素的特異性蛋白結(jié)合物（熒光抗體）自發(fā)熒光(AUTOFLUORESCENCE):組織或細胞中的某些成份受激發(fā)時可發(fā)出熒光—自發(fā)熒光。伊文斯藍、硼化氫鈉處理漂白(BLEACH)：熒光物質(zhì)受激發(fā)時，其發(fā)射熒光的能力逐漸下降并最終喪失—漂白。生物秀論壇——學術交流、資源共享、互助社區(qū)ww
4、w.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101熒光顯微鏡二、熒光顯微鏡術的基本原理高濾鏡被熒光光學被標記壓分光紫外激發(fā)探針染成像結(jié)構(gòu)的藍汞色的生熒光光綠燈物樣本學圖像激發(fā)濾鏡：從光源中分濾出一定波長范圍的激發(fā)光。帶通濾色鏡(BP)：有寬、窄帶之分。如：BP450-490長、短通濾色鏡組合（LP+KP）：LP450+KP490488nm520nm雙色鏡：雙色分光鏡；反射短波長，透過長波長。阻斷濾鏡：多為長通濾色鏡；LP490450nm490nmFITC生物秀論壇——學術交流、資源
5、共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101共聚焦激光掃描熒光顯微鏡基本配置Confocalscananddetectorunit共聚焦掃描及檢測裝置ComputerMicroscope計算機熒光顯微鏡LaserandelectronicAnti-ControlvibrationUnittable激光光源及防震臺控制裝置LeicaTCSSP-2MPAOBSConfocalSystem生物秀論壇——學術交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs
6、生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101光電倍增管檢測針孔光源共聚焦裝置針孔X/Y掃描裝置熒光顯微鏡步進聚焦電機物鏡Bio-RadLaserSharp系統(tǒng)操作，圖像處理3-D重建生物秀論壇——學術交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101光電倍增管共聚焦掃描顯微鏡光學原理檢測針孔光源針孔檢測針孔和光源針孔始終聚焦于同一點，使聚焦平面以外被激發(fā)的熒光不能進入檢測針孔?高分辨率的光學切片光源分色鏡激光穿透性強，可對樣
7、本進行一定深度光學斷層，獲得高標準的連續(xù)光學切片?實現(xiàn)三維重建物鏡樣本聚集平面生物秀論壇——學術交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101生物秀論壇——學術交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命科學實驗中心www.bbioo.com/bio101三維膠三維膠原基原基質(zhì)質(zhì)培養(yǎng)培養(yǎng)的的血血管平管平滑肌滑肌細細胞胞生物秀論壇——學術交流、資源共享、互助社區(qū)www.bbioo.com/bbs生物秀實驗頻道——生命
8、科學實驗中心www.bbioo.com/bio101共聚焦激光掃描熒光顯微鏡應用領域只要目的結(jié)構(gòu)是用熒光探針標記的，都可用共聚焦激光掃描熒光顯微鏡觀察。形態(tài)學研究：細胞凋亡、中樞神經(jīng)系的F聯(lián)系、腫瘤細胞分類……分子生物學
