《病毒與亞病毒》PPT課件

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1、第三章病毒與亞病毒第一節(jié)病毒的性質(zhì)第二節(jié)病毒的研究方法第三節(jié)病毒復(fù)制第四節(jié)病毒的非增殖性感染第五節(jié)亞病毒第六節(jié)病毒的可利用價值第一節(jié)病毒的性質(zhì)一、形態(tài)結(jié)構(gòu)二、病毒的化學(xué)組成三、病毒的理化抗性一、形態(tài)結(jié)構(gòu)1.形態(tài)和大小形態(tài)多樣,100nm以下。2.結(jié)構(gòu)：核(衣)殼+核酸或包膜（來源于核膜或細胞膜）。衣殼對稱類型螺旋對稱二十面體對稱復(fù)合對稱二、化學(xué)組成（一）病毒的核酸（DNA或RNA）1.正極性和負極性正極性(+RNA)：可作為mRNA。負極性(-RNA)：與其mRNA序列互補。雙意RNA：正極性+負極性。DNA：和m

2、RNA互補→-DNA；和mRNA序列相似→+DNA。2.感染性核酸（infectiousnucleicacid）抽提分離的病毒核酸→導(dǎo)入細胞→產(chǎn)生子代毒粒。（二）病毒的蛋白質(zhì)含量多（40-90%）；種類少（一種或幾種）。1.結(jié)構(gòu)蛋白如殼體蛋白、包膜蛋白，主要是保護、參與識別和吸附。2.功能蛋白如溶菌酶、轉(zhuǎn)錄酶等、主要參與侵入、釋放或復(fù)制。（三）、脂類和糖類都來源于細胞；種類和含量同于宿主細胞（磷脂+膽固醇）;注：少數(shù)無包膜病毒（T系噬菌體、λ噬菌體等）也有脂類。三、理化抗性1.溫度耐冷不耐熱，離體，56～60℃，3

3、0min→滅活。保存：低溫真空干燥法(-20～-196℃)；適量鹽溶液（MgCl2，MgSO4）可提高熱穩(wěn)定性。2.射線擊毀病毒核酸?；钚匀玖希ㄈ缂妆桨诽m、中性紅、丫啶橙）滲入并與核酸結(jié)合→可見光滅活。3.pH：5.0～9.0穩(wěn)定。4.脂溶劑破壞包膜，如乙醚、氯彷→分類的依據(jù)。5.化學(xué)消毒劑對氧化劑（如高錳酸鉀、次氯酸鹽）敏感；酒精、酸堿、環(huán)氧乙烷可殺滅。6.抗生素不敏感，但患病須注射。第二節(jié)病毒的研究方法一、分離與純化二、效價測定一、分離純化（一）分離1.標(biāo)本采集與除菌處理（1）采集：有足夠活病毒。如倒罐液，感染

4、者血液、分泌物等。（2）除菌處理采用抗生素、離心、過濾等。2.接種與感染表現(xiàn)（1）接種考慮宿主范圍、組織嗜性；操作簡單、易培養(yǎng)、易判斷。注：盲傳：第一次接種未出現(xiàn)癥狀，重復(fù)接種。目的：提高效價。盲傳二代后，仍未癥狀→無活病毒。（2）感染表現(xiàn)噬菌斑、壞死斑（枯斑）、蝕斑（空斑）。①噬菌斑（plaque）噬菌體→平板培養(yǎng)物→圓形的透明區(qū)域。有一定的形態(tài)，用于分離、鑒定和計數(shù)。噬菌斑②壞死斑（枯斑）植物病毒→敏感植物葉片→壞損區(qū)域。③蝕斑（空斑）動物病毒→細胞單層上→病損區(qū)。細胞內(nèi)部發(fā)生“致細胞病變效應(yīng)”（細胞聚集成團、

5、腫大、融合成多核細胞，有包涵體或裂解）。包涵體(inclusionbody)光鏡下可見、圓形、卵圓形或不定形的蛋白質(zhì)結(jié)晶。組成多為病毒顆?；虿《緛喕?；少為細胞對感染的反應(yīng)產(chǎn)物，無病毒粒子。實踐應(yīng)用病毒診斷—大小、形態(tài)、數(shù)量、組成以及位置→快速鑒別→輔助診斷。用于生物防治—昆蟲病毒→多角體（堿性蛋白）→殺蟲。（二）、病毒的純化1.標(biāo)準(zhǔn)（1）保持感染性；（2）大小、形態(tài)、密度、組成及抗原性均一。2.方法鹽析、等電點沉淀、凝膠層析、離子交換等；超速離心二、效價測定效價：指1mL培養(yǎng)液或試樣中病毒感染單位數(shù)目（噬菌斑形成單

6、位數(shù)或感染中心數(shù)）。1.物理顆粒計數(shù)：電鏡。2.感染性測定：測噬菌斑、枯斑(須用石英砂摩擦葉片)和蝕斑數(shù)。底層培養(yǎng)基2-4ml上層培養(yǎng)基0.2ml敏感菌懸液0.1ml噬菌體試樣上層培養(yǎng)液噬菌斑37℃，12h雙層平板法第三節(jié)病毒復(fù)制一、病毒的增殖過程二、一步生長曲線（one-stepgrowthcurve）一、病毒的增殖過程（E.coliT4噬菌體）吸附、侵入、生物合成、裝配和釋放。（一）吸附1.特異性吸附蛋白（VAP）→→細胞受體（細胞生長必須）。2.原理：空間結(jié)構(gòu)的互補性，氫鍵、疏水性相互作用、范德華力。（二）侵

7、入1.噬菌體：注射。2.動物病毒直穿細胞膜；細胞內(nèi)吞：累積在細胞質(zhì)的小泡內(nèi)→釋放；膜融合：包膜和細胞膜融合。3.植物病毒：傷口或口器侵入。（三）生物合成1.特點：時序性。早期轉(zhuǎn)錄→→次早期轉(zhuǎn)錄→→晚期基因表達。以E.coli的T偶數(shù)雙鏈?zhǔn)删w為例。早期mRNA早期蛋白(次早期RNA聚合酶)次早期mRNA次早期蛋白(DNA分解酶、DNA、mRNA聚合酶等)晚期mRNA晚期蛋白(衣殼蛋白、裝配酶等)核酸(DNA)復(fù)制宿主細胞RNA聚合酶dsDNA次早期DNA晚期基因2.核酸復(fù)制（1）基本規(guī)律雙鏈為半保留，單鏈先合成互補

8、鏈，再復(fù)制。（2）病毒DNA或RNA的復(fù)制雙鏈DNA和雙鏈RNA復(fù)制（半保留復(fù)制）單鏈+DNA和+RNA復(fù)制先合成負鏈，再合成正鏈。單鏈-RNA復(fù)制-RNA→+RNA(即mRNA)→-RNA。逆轉(zhuǎn)錄病毒單鏈RNA復(fù)制RNA→DNA→雙鏈DNA→單鏈RNA。（四）、裝配（五）、釋放裂解和出芽。二、一步生長曲線（描述烈性噬菌體的復(fù)制）1.具體操作敏感菌+噬菌體