《亞病毒感染因子》PPT課件

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1、第六章亞病毒感染因子Subviralagents非細(xì)胞生物朊病毒：只含蛋白質(zhì)一種組分prion亞病毒:Subvirus至少有核酸和蛋白質(zhì)兩種組分類病毒：只含具有單獨(dú)侵染性的RNA組分viroid衛(wèi)星病毒、衛(wèi)星RNA：天生缺陷病毒,satellitevirus包括衛(wèi)星RNA真病毒:Euvirus瘋牛病(MadCowdisease)一、類病毒viroid1922年發(fā)現(xiàn)，減產(chǎn)20%-70%潛伏期長，提純和電鏡觀察無病毒粒子瑞士學(xué)者T.O.Diener1971年發(fā)現(xiàn)馬鈴薯紡錘形塊莖病的病原是一種只有侵染性小分子RNA而無蛋白質(zhì)的感染因子，稱為類病毒(viroid

2、)——PSTV。類病毒經(jīng)帶毒葉片、種子以及媒介昆蟲傳播，可引起馬鈴薯、西紅柿、蘋果、柑桔、椰子等多種經(jīng)濟(jì)植物嚴(yán)重病害Potatospindletuberdisease,PSTDT.O.Diener幾項研究試驗(1967-1971,用番茄研究)1、超離心：2、有機(jī)溶劑處理：3、酚處理：4、核酸酶處理：5、密度梯度離心：105000×g僅10%在沉淀中(去脂肪)沉降系數(shù)不變RNase處理，喪失活性(蛋白變性）侵染活性更高PSTV沉降系數(shù)7~10S定義類病毒是一個裸露的閉合環(huán)狀RNA分子，它能感染寄主細(xì)胞并在其中進(jìn)行自我復(fù)制使寄主產(chǎn)生病癥。類病毒的分子量小，僅

3、為最小RNA病毒的十分之一，約10萬Da類病毒是共價閉合的單鏈環(huán)狀RNA分子，大小為246-399個核苷酸。所有的類病毒RNA沒有mRNA活性，不編碼任何蛋白馬鈴薯紡錘形塊莖病類病毒Potatospindletuberviroid(PSTV)提純后的PSTV在電鏡下觀察(脲展層)：長50nm的棒狀dsRNA分子，由2個互補(bǔ)的半體組成，一個含179個核苷酸，另一個含180個核苷酸，兩者間有70%的堿基以氫鍵方式結(jié)合，形成122個堿基對，整個棒狀結(jié)構(gòu)中有27個內(nèi)環(huán)，最大的螺旋含8個堿基對，最大的內(nèi)環(huán)含有12個核苷酸。PSTV的結(jié)構(gòu)類病毒的分類目前ICTV公布

4、的類病毒有27種，分為2個科、7個屬：1、馬鈴薯紡錘形塊莖類病毒科5屬2、鱷梨白斑類病毒科2屬類病毒病診斷和鑒定Koch’spostulates1、在病體中找不到細(xì)胞和體細(xì)胞的致病因子，可機(jī)械摩擦或昆蟲媒介傳染2、檢測小分子核酸5S~7S,區(qū)別于植物的RNAPAGE濃度5%、10%、20%(一般病毒2%）3、接種電泳帶酚抽提液接種敏感寄主4、提純生產(chǎn)實際診斷的幾種方法1、指示植物2、凝膠電泳（應(yīng)用廣，但手續(xù)復(fù)雜）3、互補(bǔ)DNA（精確，適用）分子雜交，有已知類病毒RNA類病毒的提純酚相（去掉）樣品上清（去掉）酚相（去掉）水相沉淀離心水相離心上清沉淀上清(去

5、)沉淀(類病毒)(RNA)乙醇(各種RNA)DNaseSDS酚LiCl大分子RNAbuffer酚、SDS冷乙醇破壞寄主DNA去酶蛋白類病毒致病性機(jī)理類病毒RNA分子直接干擾寄主細(xì)胞的核酸代謝類病毒也能結(jié)合到前mRNA的識別位點上，干擾mRNA的加工類病毒的+RNA和-RNA還能作為寄主基因組DNA模板的競爭者，與依賴于DNA的RNA聚合酶Ⅱ結(jié)合，使之指導(dǎo)類病毒的復(fù)制，破壞了mRNA的合成。類病毒復(fù)制類病毒的遺傳信息不足以編碼任何復(fù)制酶健康植物中含兩種類型的RNA合成系統(tǒng)：1、依賴于DNA的RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ2、依賴于RNA的RNA聚合酶類病毒RNA在

6、分子內(nèi)的高度堿基配對和G:C含量，使其非常象DNA分子，寄主的依賴于DNA的RNA聚合酶可能以其作模板合成類病毒的RNA類病毒復(fù)制的滾環(huán)理論：+RNA-RNA寡聚物+RNA寡聚物裂解成+RNA單位長度的線狀分子共價閉合環(huán)狀分子類病毒前體末端修飾環(huán)狀類病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后：首先以(+)鏈類病毒為模板轉(zhuǎn)錄生成多個單位長度的(-)鏈復(fù)制中間體，其(-)鏈復(fù)制中間體有兩種可能的命運(yùn)：先被切割，再環(huán)化：(-)鏈復(fù)制中間體先被切割生成單位長度的線狀(-)鏈分子，再自我環(huán)化，然后以環(huán)化(-)鏈為模板轉(zhuǎn)錄出多個單位長度的(+)鏈復(fù)制中間體，再進(jìn)一步修飾和連接，形成具有感染

7、性的單體環(huán)化的類病毒分子；先轉(zhuǎn)錄，再被切割修飾：多個單位長度的(-)鏈復(fù)制中間體直接轉(zhuǎn)錄生成(+)鏈復(fù)制中間體的模板，然后剪接修飾。鱷梨白斑類病毒ASBVd(+)鏈和(-)鏈復(fù)制中間體中均發(fā)現(xiàn)有錘頭樣核酶結(jié)構(gòu)，因此推測ASBVd可能是采取第一種復(fù)制途徑，而PSTVd可能是利用第二種復(fù)制途徑。類病毒復(fù)制的滾環(huán)理論類病毒的起源推測、設(shè)想：1、原始生命形態(tài)非生命—類病毒—病毒—原始細(xì)胞……2、起源于寄主核酸存在于細(xì)胞核，與寄主核酸同源性高3、起源于病毒核酸缺失編碼外殼蛋白的基因，RNA噬菌體核酸復(fù)制類病毒病的防治1、綜合防治避病、防侵染、培育無病種苗、防治傳播

8、介體2、抗病品種3、藥劑：微量元素ZnSO4、H3BO3、CuSO4等4、弱毒株