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1、實(shí)驗(yàn)二槐米中蘆丁的提取和蘆丁水解制備槲皮素一、概述植物來(lái)源：槐米系豆科植物槐樹(shù)（sophorajaponicaL.）的花蕾（槐米），蘆丁含量高達(dá)12%~20%。蕎麥中含量也較高。含蘆丁成分的植物高達(dá)70種以上。功效：蘆丁經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明具有調(diào)節(jié)毛細(xì)血管滲透作用，具有維生素P樣作用。在臨床上用作毛細(xì)血管止血藥，常作為高血壓病的輔助用藥。蘆丁為槐米中主要有效成分。主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)：蘆丁（Rutin）也稱(chēng)蕓香苷，是槲皮素3位上的羥基與蕓香糖脫水縮合形成的苷(蕓香糖為葡萄糖與鼠李糖組成的雙糖)。分子式：C27H30O16·3H2O，淡黃色針狀結(jié)晶，含三分子結(jié)晶水
2、，熔點(diǎn)174～178℃,無(wú)水物為188~190℃。易溶于堿液，顯橙黃色，酸化后又析出。在冷水中的溶解度為1：10000，熱水中為1：200，在冷乙醇中為1：650，在熱乙醇中為1：60，在吡啶中為1：12。微溶于乙酸乙酯和丙酮，難溶于苯、三氯甲烷、石油醚等極性小有機(jī)溶劑，可溶于硫酸和鹽酸，加水稀釋又可析出。UVEtOHmax：259，299，359nm。蘆丁用20%HSO4水溶液水解可得槲皮素（蘆丁的苷元），呈黃色結(jié)晶，313～314℃，C15H10O7·2H2O，在熱乙醇中溶解度為1：23，冷乙醇中1：290，難溶于水和苯等極性小的有機(jī)溶劑，可溶于極性較大的有機(jī)
3、溶劑如甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。UVEtOHmax：255，269sh,301sh,370nm。其他成分理化性質(zhì)：皂苷（saponin）粗品為白色粉末，m.p.210～220℃。易溶于吡啶。能溶于200倍的甲醇，酸水解后獲得兩種苷元（白樺酯醇、槐花二醇）及糖（糖為葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸內(nèi)酯）。白樺酯醇（betulin）無(wú)色針晶，m.p215～217℃,能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、三氯甲烷、苯等；難溶于石油醚?；被ǘ迹⊿ophoradiol）無(wú)色針晶，m.p219～220℃或224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇，難溶于水。蘆丁和槲皮素結(jié)構(gòu)式如下所
4、示。OHHOOOHOHHOOOHOHOOH2OHOHOOCOHOCH3OHOOHOHOHOH蘆丁MW664.6(含三分子水)槲皮素MW338.3（含二分子水）1實(shí)驗(yàn)部分（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?.制備蘆丁，供藥用。2.通過(guò)蘆丁的制備，掌握黃酮類(lèi)化合物的提取分離的原理和操作。3.掌握黃酮苷水解制備黃酮苷元的方法。4.熟悉重結(jié)晶技巧。5.了解和掌握黃酮類(lèi)化合物的一些主要性質(zhì)和鑒定方法。（二）實(shí)驗(yàn)的基本原理1.蘆丁的提取原理利用蘆丁結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)酚羥基，呈酚酸性，能在堿水中溶解的性質(zhì)，可用堿性溶劑進(jìn)行提取，提取液加酸后可沉淀析出（堿溶酸沉法）。也可利用蘆丁在冷水中溶解度小，在
5、熱水中溶解度大的性質(zhì)進(jìn)行提取。2.蘆丁的分離原理利用蘆丁結(jié)構(gòu)在冷乙醇中溶解度小，在熱乙醇中溶解度大，以及在熱水中溶解度大，在冷水中溶解度小，蘆丁用溶劑加熱溶解后，趁熱抽濾，濾液放冷后就能析出而達(dá)到分離的目的（如不純可再重復(fù)操作進(jìn)行分離）。也可采用醇-水法進(jìn)行精制。3.蘆丁的鑒定原理（1）利用吸附薄層色譜的分離原理，蘆丁與蘆丁對(duì)照品在同一條件下進(jìn)行展開(kāi)，顯色，以達(dá)到鑒定蘆丁的目的。（2）通過(guò)專(zhuān)屬的化學(xué)顯色反應(yīng)，確定蘆丁的成分類(lèi)型（黃酮類(lèi)）。(三)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.用酸堿法、水提法、醇提法提取槐米中蘆丁。2.在酸性條件下加熱回流水解蘆丁，制備槲皮素。3.溶劑重結(jié)晶純化蘆丁和
6、槲皮素。4.薄層色譜法和顯色反應(yīng)鑒定蘆丁和槲皮素(四)實(shí)驗(yàn)藥材儀器與試劑1.實(shí)驗(yàn)藥材槐米20g。2.儀器：500ml燒杯，1000ml燒杯，250ml園底燒瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml錐形瓶、50ml錐形瓶、研缽、減壓過(guò)濾裝置，布氏漏斗，層析缸等。3.試劑：硼砂、氧化鈣、HCI、H2SO4、三氯化鋁、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、濾紙等。（五）實(shí)驗(yàn)方法與注意事項(xiàng)1.蘆丁的提?。?）方法一（堿溶酸沉法）稱(chēng)取槐米粗粉20g，在研缽中研碎后放入500ml燒瓶中，加0.4%硼砂水溶液200ml，用加熱磁力攪拌器加熱微沸后，加石灰乳（1.5g氧化鈣加入10m
7、l水研成乳液）調(diào)PH8~9，一邊加一邊攪拌，加熱微沸30min，補(bǔ)充失去的水分，并保持溶液PH8~9，靜置約5分鐘過(guò)濾（或趁熱抽濾），藥渣（第二次提取）再用0.4%硼砂水溶液200ml煮沸半小時(shí)（此時(shí)不需加石灰乳），隨時(shí)加水補(bǔ)充失去的水分，合并兩次濾液（總體積約400ml），放冷（60~70℃），小心滴加濃鹽酸，同時(shí)快速攪拌調(diào)制溶液PH4，室溫放置或在冰箱中放置（過(guò)夜），沉淀，待全部沉淀物析出后，減壓抽濾，用少量蒸餾水（約10ml）洗滌蘆丁粗品，抽干，室溫下晾干，得粗制蘆丁，稱(chēng)重，計(jì)算得率。（2）方法二（水提取法）稱(chēng)取槐米粗粉20g，在研缽中研碎后放入500ml燒
8、瓶中，加沸
