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《水稻蠟質(zhì)基因OsCER4的原核表達(dá)及多克隆抗體制備.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第25卷第1期仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院學(xué)報Vo1．25，No．12012年3月JournalofZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineeringMarch，2012水稻蠟質(zhì)基因OsCER4的原核表達(dá)及多克隆抗體制備周玲艷，秦華明。，周海，楊家偉，莊楚雄(1．仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510225；2．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510642；3．暨南大學(xué)W-Y-學(xué)院，廣東廣州，510564)摘要：利用PCR方法擴(kuò)增水稻(OryzasativaL．)蠟質(zhì)基因OsCER4的開放閱讀框
2、(Openreadingframe，ORF)，并克隆到原核表達(dá)載體pET-23d上，將表達(dá)載體OsCER4-pET轉(zhuǎn)入大腸桿菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)菌株，以1．2mmol／L的異丙基一p—D一硫代吡喃半乳糖苷(IsopropylB—D·thiogalactoside，IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白，然后以融合蛋白作為抗原免疫家兔，制備多克隆抗體．SDS-PAGE電泳分析結(jié)果表明，成功誘導(dǎo)表達(dá)了分子量約為71．6kD的融合蛋白，而Westernblot檢測表明，免疫家兔的抗血清與水稻幼苗總蛋白雜交信號較好．
3、0s．CER4抗體的制備有助于研究OsCER4基因的表達(dá)特性．關(guān)鍵詞：水稻(OryzasativaL．)；OsCER4基因；原核表達(dá)；多克隆抗體中圖分類號：Q511文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1674—5663(2012)O1—0011—04ProkaryoticexpressionandpolyclonalantibodypreparationofwaxgeneOsCER4inriceZHOULing—yan'，QINHua—ming，ZHOUHai，YANGJia—wei，ZHUANGChu．xiong(1．Collegeofli
4、fesciences，ZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineering，Guangzhou510225，China；2．Collegeoflifesciences，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China；3．CollegeofScienceandTechnology，JinanUniversity，Guangzhou，510632，China)Abstract：TheORFofOsCER4geneinricewasobt
5、ainedbyPCRandclonedintotheprokaryotieexpres—sionvectorpET-23d，thentheresuhingrecombinantvectorwasintroducedintoEscherichiacolistrainBL21(DE3)andinducedtoexpresstheOsCER4fusionproteinby1．2mmol／Lisopropyl-B-D—thiogal-actoside(IPTG)．TheOsCER4fusionproteinwasusedasantigen
6、toimmunerabbits．Theresultsshowedthattheproteinof71．6kDwasexpressedsuccessfullybyinductionwithIPTGandthepolyclonalantibodieswereobtainedbyusingOsCER4fusionproteinasantigentoimmunerabbitsandtheimmuno—logicalspecificityofthepolyclonalantibodytoOsCER4wasconfirmedbyWestern
7、blotanalysis．ThepreparationofOsCER4antibodieswascontributedtodetecttheexpressionpatternofOsCER4geneinrice．Keywords：rice(OryzasativaL．)；OsCER4gene；prokaryotieexpression；polyclonalantibody植物表皮蠟質(zhì)是覆蓋在植物最外層的一類有機(jī)害和防止某些昆蟲的蠶食等功能J．混合物的總稱，它是植物自我防護(hù)的最后一道屏OsCER4與擬南芥(Arabidopsistha
8、liana)CER1障，在植物生長發(fā)育過程中起重要作用．一般認(rèn)為和水稻(OryzasativaL．)Wda!基因的同源性較表皮蠟質(zhì)具有阻止植物組織內(nèi)水分的非氣孔性散高．CER1基因主要在莖、花和果實中表達(dá)，CER1失_l、防止植物被有害光線損傷、維
