最新新編課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課件教學(xué)講義ppt.ppt

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1、新編課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課件課標(biāo)領(lǐng)航1．舉例說明什么是選擇培養(yǎng)基，并研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。2．設(shè)置重復(fù)組和對照組，對土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)。【重點(diǎn)】選擇培養(yǎng)基的作用。【難點(diǎn)】菌落數(shù)目的統(tǒng)計(jì)。課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等；配置合適的培養(yǎng)基方法：⑴抑制大多數(shù)微生物生長⑵造成有利于該菌生長的環(huán)境，結(jié)果：培養(yǎng)一定時(shí)間后，該菌數(shù)

2、量上升，再通過稀釋涂布平板法等方法對它進(jìn)行純化培養(yǎng)分離。（1）將土壤中的固氮菌分離出來（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來舉一反三（3）篩選出抗青霉素的微生物（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基思考：④怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是分離尿素細(xì)菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實(shí)驗(yàn)組對照組培養(yǎng)基類型是否接種目的結(jié)果只生長尿素細(xì)菌生長多種微生物是如何對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)？1顯微鏡直接計(jì)數(shù)：利用血球計(jì)數(shù)板(血細(xì)胞計(jì)數(shù)板），在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。缺點(diǎn):不能區(qū)

3、分死菌與活菌；不適于對運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；2.間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）⑴原理：在稀釋度足夠高時(shí)，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的，即一個(gè)菌落代表原先的一個(gè)單細(xì)胞。⑵常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。(二)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目方法運(yùn)用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)。原理1個(gè)菌落←1個(gè)活菌①選擇菌落數(shù)在30～300的平板上計(jì)數(shù)。②需培養(yǎng)計(jì)算出三個(gè)或三個(gè)以上的平板菌落求平均數(shù)。

4、③統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。注意事項(xiàng)看課本P22，并討論你認(rèn)為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如果有問題，錯(cuò)在哪？第一位同學(xué)：沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布3個(gè)平板）第二位同學(xué)：A組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計(jì)算平均值計(jì)算公式：某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B(三)設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)閱讀P22～23頁“（三）設(shè)置對照”一段討論教材中提出的問題。設(shè)置對照的目的：排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。(1)

5、A同學(xué)出現(xiàn)此結(jié)果的可能原因？⑴土樣不同⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質(zhì))(2)設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，幫助A同學(xué)排除上述兩個(gè)可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素？小結(jié)：這個(gè)實(shí)例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少方案一：由其他同學(xué)用與A同學(xué)相同土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案二：將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測：如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明______；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在_____________________________________A無誤操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。實(shí)驗(yàn)流程：樣品稀釋涂布平板微生

6、物的培養(yǎng)與觀察菌落計(jì)數(shù)二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤取樣制備培養(yǎng)基（一）土壤取樣從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。土壤——“微生物的天然培養(yǎng)基”土壤中的微生物數(shù)量最大、種類最多大約70%—90%是細(xì)菌◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。（二）制備培養(yǎng)基制備選擇培養(yǎng)基（尿素為唯一氮源）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。（對照作用）思考？為什么還要制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基？

7、（三）樣品稀釋涂布平板稀釋倍數(shù)為101～106。每個(gè)稀釋度均用3個(gè)選擇培養(yǎng)基和1個(gè)蛋白胨培養(yǎng)基。㈣.取樣涂布◆實(shí)驗(yàn)時(shí)要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等?！舴蛛x不同的微生物采用不同的稀釋度稀釋倍數(shù)目的細(xì)菌104、105、106保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)的平板放線菌103、104、105真菌102、103、104原因：不同微生物在土壤中含量不同㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)