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1、新編課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)課件課標領(lǐng)航1．舉例說明什么是選擇培養(yǎng)基，并研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。2．設(shè)置重復(fù)組和對照組，對土壤中分解尿素的細菌進行分離和計數(shù)。【重點】選擇培養(yǎng)基的作用。【難點】菌落數(shù)目的統(tǒng)計。課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細菌利用尿素的原因土壤中的細菌分解尿素是因為它們能合成脲酶4要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等；配置合適的培養(yǎng)基方法：⑴抑制大多數(shù)微生物生長⑵造成有利于該菌生長的環(huán)境，結(jié)果：培養(yǎng)一定時間后，該菌數(shù)
2、量上升，再通過稀釋涂布平板法等方法對它進行純化培養(yǎng)分離。（1）將土壤中的固氮菌分離出來（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來舉一反三（3）篩選出抗青霉素的微生物（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基思考：④怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是分離尿素細菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實驗組對照組培養(yǎng)基類型是否接種目的結(jié)果只生長尿素細菌生長多種微生物是如何對細菌進行計數(shù)？1顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板(血細胞計數(shù)板），在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。缺點:不能區(qū)
3、分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數(shù)；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；2.間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）⑴原理：在稀釋度足夠高時，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的，即一個菌落代表原先的一個單細胞。⑵常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。(二)統(tǒng)計菌落數(shù)目方法運用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)。原理1個菌落←1個活菌①選擇菌落數(shù)在30～300的平板上計數(shù)。②需培養(yǎng)計算出三個或三個以上的平板菌落求平均數(shù)。
4、③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。注意事項看課本P22，并討論你認為這兩位同學的作法正確嗎？如果有問題，錯在哪？第一位同學：沒有重復(fù)實驗（至少涂布3個平板）第二位同學：A組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計算平均值計算公式：某同學在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B(三)設(shè)置對照實驗閱讀P22～23頁“（三）設(shè)置對照”一段討論教材中提出的問題。設(shè)置對照的目的：排除實驗組中非測試因素對試驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。(1)
5、A同學出現(xiàn)此結(jié)果的可能原因？⑴土樣不同⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質(zhì))(2)設(shè)置對照實驗，幫助A同學排除上述兩個可能影響實驗結(jié)果的因素？小結(jié)：這個實例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少方案一：由其他同學用與A同學相同土樣進行實驗方案二：將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測：如果結(jié)果與A同學一致，則證明______；如果結(jié)果不同，則證明A同學存在_____________________________________A無誤操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。實驗流程：樣品稀釋涂布平板微生
6、物的培養(yǎng)與觀察菌落計數(shù)二、實驗設(shè)計土壤取樣制備培養(yǎng)基（一）土壤取樣從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。土壤——“微生物的天然培養(yǎng)基”土壤中的微生物數(shù)量最大、種類最多大約70%—90%是細菌◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。（二）制備培養(yǎng)基制備選擇培養(yǎng)基（尿素為唯一氮源）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。（對照作用）思考？為什么還要制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基？
7、（三）樣品稀釋涂布平板稀釋倍數(shù)為101～106。每個稀釋度均用3個選擇培養(yǎng)基和1個蛋白胨培養(yǎng)基。㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等?！舴蛛x不同的微生物采用不同的稀釋度稀釋倍數(shù)目的細菌104、105、106保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計數(shù)的平板放線菌103、104、105真菌102、103、104原因：不同微生物在土壤中含量不同㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)
