分選效果的影響因素

《分選效果的影響因素》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、分選效果的影響因素分選純度：1.液滴的分選模式。（如果要保證分選的純度則選擇purity模式，如果要盡可能分到更多的細(xì)胞則選擇yield模式，但這會(huì)使得率下降）2.確保液滴延遲時(shí)間準(zhǔn)確。（用bead調(diào)節(jié)Dropdelay>98%，保證細(xì)胞分選純度）3.選擇合適的進(jìn)樣速度，保證效率>75%，70um噴嘴流速一般不超過(guò)20000cell/s，100um噴嘴流速一般不超過(guò)6000cell/s。（按具體情況決定，一般最佳分選速度=1/(3-4)*DDF（DDF-液滴振蕩頻率）4.團(tuán)塊影響和門的設(shè)定。（在流式圖上清

2、晰地選擇目的細(xì)胞，上樣前用40或70um無(wú)菌濾膜進(jìn)行過(guò)濾，去除團(tuán)塊，保證樣品為單細(xì)胞懸液）5.液流穩(wěn)定性，液流的穩(wěn)定決定著Dropdelay的準(zhǔn)確度。（如果不穩(wěn)定，請(qǐng)用無(wú)菌水沖洗，待液流穩(wěn)定后再分選。70um噴嘴換成100um噴嘴時(shí)，因?yàn)閴毫p少，所以需要1h左右穩(wěn)定液流）分選得率：1.確保液滴延遲時(shí)間準(zhǔn)確。（不準(zhǔn)確的液滴延遲會(huì)使大量的非目的細(xì)胞被分選，純度下降的同時(shí)導(dǎo)致得率下降）2.選純度（purity）模式會(huì)犧牲得率。（如果陽(yáng)性細(xì)胞和陰性細(xì)胞粘在一起，純度模式會(huì)將其丟失），如果不需要高純度，可以選擇富

3、集（Yield）模式。3.盡量選擇70um的噴嘴，同樣體積的溶液，比其它大的噴嘴可以得到更多的細(xì)胞。但還是要根據(jù)具體樣品情況選擇噴嘴，易碎的細(xì)胞盡量選用低壓和大噴嘴。（噴嘴越大，形成的液滴越大，對(duì)細(xì)胞的沖擊越小，對(duì)細(xì)胞的保護(hù)越好）4.選擇合適的進(jìn)樣速度，保證效率>75%。（速度越大，效率越低）分選活性：1.與儀器的無(wú)菌清洗有關(guān)。要用無(wú)菌水長(zhǎng)時(shí)間沖洗干凈。（常規(guī)開(kāi)機(jī)時(shí)先用酒精沖洗15min，流速為1，然后用無(wú)菌水沖洗30-45min，流速為11。關(guān)機(jī)時(shí)先用clean沖洗15min，流速為1，然后用無(wú)菌水沖洗

4、30-45min，流速為11）2.與壓力有關(guān)。對(duì)于容易破碎的細(xì)胞，盡量采用低壓和大噴嘴（包裹細(xì)胞的液滴越大，對(duì)細(xì)胞的沖擊越小，對(duì)細(xì)胞的保護(hù)越好）。1.與噴嘴大小有關(guān)。（分選分的是液滴，而不是細(xì)胞，大噴嘴形成大液滴，液滴越大，在加電偏轉(zhuǎn)時(shí)，液滴所起的主導(dǎo)作用較大，小噴嘴形成小液滴，往往在加電偏轉(zhuǎn)時(shí)，細(xì)胞所起的主導(dǎo)作用較大，更有可能打在管壁上，造成細(xì)胞破碎，且大噴嘴的壓力小，對(duì)細(xì)胞傷害小）2.與細(xì)胞經(jīng)過(guò)的管壁光滑度有關(guān)。（尤其是上樣針，需定期由工作人員更換）3.與收集管中培養(yǎng)液的液面有關(guān)。(調(diào)節(jié)時(shí)保證液滴打在

5、液面上，防止細(xì)胞打在管壁上影響活性。建議15ml收集管液面高于3ml，5ml收集管液面高于1ml)4.與細(xì)胞本身的活性有關(guān)。5.樣本的制備方法。（建議在冰上孵育，且放置時(shí)間不要過(guò)久）