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1、杜仲葉中綠原酸的提取純化研究 關(guān)鍵詞：綠原酸；提?。患兓?；杜仲葉 StudyontheExtractionandPurificationofChlorogenicAcidinEumiaulmoidesOliv.Leaves Abstract：ObjectiveTostudytheoptimumextractionandpurificationprocessforchlorogenicacidinEumiaulmoidesOliv.Leaves.MethodsTheprocessethanolr
2、ecrystallization.ResultsTheextractingratioofchlorogenicacidumandimprovedtechnologyfortheextractionandpurificationofchlorogenicacidinEumiaulmoidesOliv.LeavesiaulmoidesOliv. 杜仲EumiaulmoidesOliv.是我國特有的經(jīng)濟樹種，其藥用價值歷來受到人們關(guān)注。杜仲中主要有效成分綠原酸具有抗菌、抗病毒、利膽、保肝、降壓、清除自由
3、基等作用。2000多年前我國的《神農(nóng)本草經(jīng)》就將之列為中藥上品。近年來研究表明杜仲葉中的主要化學成分和杜仲皮基本一致，且杜仲葉中綠原酸含量更為豐富，達到干葉重的1%~5%，因此從原材料豐富且價廉的杜仲葉中提取綠原酸成為研究熱點［1～3］。其中錢驊［4］、劉軍海等［5］提出的大孔吸附樹脂提取純化法展示了一定的工業(yè)化前景，但報道的樹脂分離效果不一致，且均未見有關(guān)終產(chǎn)品純度及收率的報道。杜仲葉提取物中除含綠原酸外，還含有鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、多糖等物質(zhì)。為了得到純度較高的綠原酸，必須對提取液進行多步分離純化。本文
4、在文獻工作的基礎(chǔ)上，圍繞產(chǎn)業(yè)化目標，改進完善了提取制備工藝，采用水提、絮凝脫色、樹脂吸附、重結(jié)晶工藝提取制備了純度與收率較高的綠原酸?！ ?材料與方法 1.1材料與儀器杜仲葉采自湖北五峰（風干、粉碎）；主要試劑乙醇、甲醇、稀鹽酸等均為分析純；殼聚糖為生化試劑；NKA9，AB8，NKAⅡ型樹脂(南開大學化工廠)；綠原酸（中國藥品生物制品檢定所）。ZFⅠ型紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；Agilent1100型高效液相色譜儀?！ ?.2提取純化工藝準確稱取10.0g杜仲葉，用去離子水2×120ml在
5、80℃下動態(tài)提取150min，過濾,提取液減壓濃縮至100ml，濃縮液中加入1%殼聚糖溶液4ml絮凝，過濾，濾液用活性碳脫色，得進樣清液，用NKA9樹脂吸附進樣清液，用50%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，得綠原酸粗品，經(jīng)甲醇重結(jié)晶得綠原酸純品。提取率≥65%（以杜仲葉中綠原酸含量計），純度≥97%?！ ?.3綠原酸的含量檢測綠原酸的含量測定參照文獻［6，7］進行。 2結(jié)果 2.1提取條件 2.1.1提取溶劑的選擇杜仲葉中綠原酸的提取一般選用40%乙醇水溶液，使用乙醇水溶液提取除增加溶劑成本以外
6、，提取液中的脂溶性成分增加，造成后續(xù)處理困難，綠原酸在熱水中溶解度較大，本文選用水為提取溶劑?！ ?.1.2提取溫度的選擇隨著提取溫度的升高，綠原酸得率不斷增加，當溫度高于80℃時，綠原酸得率開始下降。隨著溫度的升高，杜仲葉中其它成分的溶出也不斷增加，同時考慮到綠原酸的熱不穩(wěn)定性，提取溫度控制在80℃以下。 2.1.3提取時間的影響隨著時間的延長，綠原酸得率逐漸升高，尤其是在50～150min內(nèi)，二者幾乎呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，隨后逐漸達到提取平衡狀態(tài)?！ ?.1.4浸提液pH值的影響在溫度、料液比、
7、提取時間一致的條件下，用稀鹽酸調(diào)節(jié)提取溶劑的pH值，當pH值為4時，綠原酸得率較高。因此，綠原酸的最佳提取工藝條件為：每10.0g杜仲葉，用2×120ml去離子水在pH=4及溫度80℃下動態(tài)提取150min?！ ?.2絮凝脫色傳統(tǒng)中藥提取工藝中常常采用水提醇沉法，目的是除去提取液中的淀粉、樹膠、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、多糖、無機鹽等無效成分。實驗發(fā)現(xiàn)，水提醇沉法中醇的濃度越高越有利于除去雜質(zhì)，但有效成分由于醇沉包夾損失也隨之增大。另外水提醇沉工藝還存在乙醇消耗量大、生產(chǎn)成本高、生產(chǎn)安全系數(shù)低等缺點，因
8、此需要改進工藝。絮凝澄清法是在中藥提取液或提取濃縮液中加入一種絮凝劑以吸附架橋及電中和方式除去溶液中的某些物質(zhì)，以達到分離純化的目的［8］。實驗通過絮凝劑種類、濃度及絮凝溫度、酸度的選擇比較，確定優(yōu)化的絮凝脫色工藝為：每100ml濃縮液中加入1%殼聚糖溶液4ml，攪拌，在60℃靜置60min，過濾，濾液用1g活性碳脫色，得進樣清液?！ ?.3大孔吸附樹脂的選擇結(jié)合杜仲葉浸提物的特性，本文對NKA-9，AB-8，NKA-Ⅱ3種極性的大孔吸附樹脂進行選擇比較。樹脂根據(jù)文獻
