酶聯(lián)法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體陽(yáng)性分析

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1、酶聯(lián)法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體陽(yáng)性分析【摘要】目的了解采用間接酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體(抗HCV)的陽(yáng)性情況。方法ELISA法進(jìn)行抗HCV測(cè)定，篩選出陽(yáng)性血清141份按S/CO和年齡分組,分別進(jìn)行比較。結(jié)果1≤S/CO<3.8的例數(shù)占總陽(yáng)性率的27.7%，S/CO≥3.8的例數(shù)占總陽(yáng)性率的72.3%；20～49歲與50～80歲的例數(shù)分別占總陽(yáng)性率的31%和69%，兩組存在明顯差別(P＜0.001)。結(jié)論采用間接ELISA法檢測(cè)抗HCV有一定的干擾因素，可導(dǎo)致陽(yáng)性率偏高。臨床診斷時(shí)它只能作為一個(gè)篩查實(shí)驗(yàn)，抗HCV陽(yáng)性不能完全證明體內(nèi)存在丙型肝炎病毒感染，

2、要做相關(guān)檢查慎重診斷，有條件時(shí)進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)才能確診。【關(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒抗體間接酶聯(lián)免疫法目前丙型肝炎感染的免疫測(cè)定應(yīng)用最廣泛的是間接酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體(抗HCV)，影響ELISA測(cè)定抗體的因素是包被抗原的純度、機(jī)體內(nèi)較高的IgG類抗體濃度和標(biāo)本中含有超氧化物歧化酶(SOD)等，這些都易引起假陽(yáng)性反應(yīng)，現(xiàn)將我院臨床標(biāo)本陽(yáng)性情況報(bào)道如下。1對(duì)象與方法1.1觀察對(duì)象在我院通過(guò)常規(guī)篩檢實(shí)驗(yàn)為抗HCV陽(yáng)性標(biāo)本共141例，其中男80例，女61例,年齡20～80歲。1.2儀器與試劑半自動(dòng)酶標(biāo)儀,洗板機(jī),試劑由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司。1.3統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS軟

3、件行χ2檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1將141例抗HCV陽(yáng)性樣本按S/CO值分組，1≤S/CO＜3.8者39例,占27.7%；S/CO≥3.8者102例，占72.3%。來(lái)自美國(guó)的研究表明間接ELISA法檢測(cè)抗HCV，S/CO≥3.8時(shí)才高度預(yù)示抗HCV呈陽(yáng)性狀態(tài)，并建議對(duì)S/CO≥3.8的標(biāo)本做確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。2.2將抗HCV陽(yáng)性樣本按年齡分組，年齡50～80歲組的抗HCV陽(yáng)性患者98例，占總陽(yáng)性百分率的69.5%，而20～49歲以下年齡組的抗HCV陽(yáng)性患者43例，僅占總陽(yáng)性率的30.5%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。3討論抗HCV是目前臨床診斷丙型肝炎感染的常用指標(biāo)，

4、主要用于檢測(cè)急、慢性或既往丙型肝炎病毒感染和測(cè)定獻(xiàn)血員存在感染的可能性。我國(guó)丙型肝炎感染率僅次于乙型肝炎。患急性丙型肝炎后約有55%～85%的患者可變成慢性丙型肝炎，其中5%～20%的患者20～25年后可發(fā)展為肝硬化，肝硬化患者10年內(nèi)30%發(fā)展為終末期肝病。丙型肝炎自然轉(zhuǎn)陰率低，治療效果差，病程遷延，且與肝硬化、肝癌等的發(fā)生及發(fā)展顯著相關(guān)［1］。ELISA間接法檢測(cè)抗HCV仍是目前常用的手段,由于存在一定的影響因素會(huì)導(dǎo)致抗HCV出現(xiàn)假陽(yáng)性,尤其是弱陽(yáng)性?？躬睭CV出現(xiàn)假陽(yáng)性的主要原因是：①類風(fēng)濕因子(RF)的干擾，RF可大量存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及某些患有自身免疫性疾病患者的體

5、內(nèi)，RF多為IgG，它有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點(diǎn)。因此在抗HCV測(cè)定中，如血清標(biāo)本中存在RF，則其可以與固相上的IgG和酶標(biāo)的IgG結(jié)合,而出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。②高免疫球蛋白血癥，抗HCV的間接法最后一步加的是酶標(biāo)的抗人IgG,血清中的高濃度的非特異IgG可能會(huì)致非特異地吸附于固相表面,從而與后加的酶標(biāo)抗人IgG結(jié)合,造成假陽(yáng)性。③標(biāo)本中SOD的干擾。用于包被固相的重組HCV抗原片段C100如為酵母菌產(chǎn)生的SOD融合蛋白,則標(biāo)本中的SOD升高可能會(huì)造成抗HCV假陽(yáng)性結(jié)果。④用于固相包被的HCV基因工程抗原不純［2］。另外，篩查實(shí)驗(yàn)S/CO比值能預(yù)測(cè)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)結(jié)果：許多早期

6、研究顯示，HCV抗體ELISA篩查弱陽(yáng)性的結(jié)果，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)及臨床證實(shí)為陰性。據(jù)美國(guó)一些血站提供給美國(guó)疾病與控制中心(CDC)的資料明確顯示，篩查實(shí)驗(yàn)S/CO比值能用來(lái)預(yù)測(cè)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)結(jié)果；用美國(guó)FDA批準(zhǔn)的兩家ELISA試劑進(jìn)行篩查實(shí)驗(yàn)，當(dāng)S/CO≥3.8時(shí)，高度預(yù)示HCV抗體呈陽(yáng)性狀態(tài)。2000年美國(guó)的研究資料對(duì)HCV抗體篩查弱陽(yáng)性結(jié)果的常規(guī)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)對(duì)抗體弱陽(yáng)性樣本進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，其中86%～88%為陰性。也對(duì)HCV抗體篩查陽(yáng)性的樣本進(jìn)行RIBA確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，他們觀察了1000例結(jié)果(來(lái)自7.5%血清陽(yáng)性預(yù)期值的人群)，其中75例ELISA陽(yáng)性，75例中有65例S/CO比值≥3.8，

7、64例重組免疫印跡實(shí)驗(yàn)(RIBA)陽(yáng)性，占98.5%；75例中有10例S/CO比值＜3.8，3例RIBA陽(yáng)性。目前美國(guó)已經(jīng)采用了CDC的新導(dǎo)則，現(xiàn)在僅對(duì)篩查試驗(yàn)S/CO比值≥3.8的樣本做RIBA補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)，這樣既節(jié)約了大量資金，又使檢驗(yàn)結(jié)果更加可靠。篩查實(shí)驗(yàn)S/CO比值的應(yīng)用能增加確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的價(jià)值，提高目前試驗(yàn)的準(zhǔn)確性［3］。因此本資料統(tǒng)計(jì)抗HCV的S/CO＜3.8的陽(yáng)性人群中大部分可能存在假陽(yáng)性結(jié)果；另一方面通過(guò)對(duì)臨床觀察:50歲以上抗HCV陽(yáng)性患者在總陽(yáng)性中占有