酶聯(lián)免疫法檢測血清丙肝抗體假陽性的臨床分析

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1、酶聯(lián)免疫法檢測血清丙肝抗體假陽性的臨床分析鄧細球劉月玫(廣東省中山市南朗醫(yī)院檢驗科528451)【摘要】目的：分析酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測血清丙肝抗體(HCV-Ab)假陽性的原因，探討有效的解決對策。方法：回顧性分析我院60例用EUSA法檢測的血清丙肝抗體陽性血清標木，然后采用聚合酶鏈反應(PCR)方法進行確證試驗，以明確假陽性標木，分析影響ELISA法出現(xiàn)假陽性的因素。結(jié)果：釆用ELISA法檢測血清丙肝抗體陽性的60份血清標木經(jīng)PCR檢測依然發(fā)現(xiàn)為陽性49例，EUSA法檢測真陽性率為80.2%,假陽性率為19.

2、8%。兩種檢測方法在血清丙肝抗體陽性檢出率方面的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論：影響EUSA法檢測血清丙肝抗體結(jié)果假陽性的因素較多，檢驗人員應規(guī)范操作，避免不利因素，降低假陽性率，對于懷疑假陽性的血清標木應及時的進行HCV-RNA檢測?！娟P(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫法；血清丙肝抗體；假陽性【中圖分類號】R446【文獻標識碼】A【文章編號】2095-1752(2015)30-0072-02丙型肝炎(HepatitisC)是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的一種傳染性疾病，隨著病情的進展可發(fā)展為肝硬化，甚至肝癌，嚴重威

3、脅到了患者的生命健康。目前臨床上把檢測血清丙肝抗體(HCV-Ab)做為診斷丙肝的重要依據(jù)，酶聯(lián)免疫法(EUSA)是目前臨床檢測血清丙肝抗體的主要方法，該檢測方法靈敏度高，特異性強，因此在臨床得到了廣泛應用［1］。但ELISA法在檢測血清丙肝抗體時也存在假陽性問題，木文將分析EUSA法檢測血清丙肝抗體假陽性的原因，并探討有效的解決對策。1.資料與方法1.1一般資料選取我院2013年1月至2015年6月60例用ELISA法檢測的血清丙肝抗體陽性血清標本，所有血清標本均來自我院住院及門診收治的患者。1.2檢測方法酶聯(lián)免疫法

4、采用全自動酶聯(lián)免疫檢測儀，抽取患者清晨空腹靜脈血3?5ml,離心分離血清后1?2h采用EUSA法檢測血清中的丙肝抗體，試劑由北京萬泰生物技術(shù)有限公司提供，嚴格按照說明書進行操作。對ELISA法檢測結(jié)果均為陽性的血清標本再次行聚合酶鏈反應（PCR）檢測方法進行確證試驗，使用美國ABI7500實吋熒光定量PCR擴增儀，檢測血清HCV-RNA,試劑由上海科華生物技術(shù)有限公司提供，嚴格按照說明書進行操作，以明確假陽性。1.3統(tǒng)計學處理采用SPSS16.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料用率（％）表示，采用X2檢驗，以P<

5、;0.05為差異右統(tǒng)計學意義。1.結(jié)果采用ELISA法檢測血清丙肝抗體陽性的60份血清標本經(jīng)PCR檢測依然發(fā)現(xiàn)為陽性49例，陰性11例，ELISA法檢測真陽性率為80.2%,假陽性率為19.8%。兩種檢測方法在血清丙肝抗體陽性檢出率方面的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。2.討論EUSA法檢測血清丙肝抗體具奮快速簡便、特異性強、靈敏度高、早期測出抗體等優(yōu)點，因此對于臨床診斷丙型肝炎具有重要的意義。EUSA試劑盒所用包被抗原為合成多肽抗原和基因工程抗原，將血清加入己包被抗原的反應孔內(nèi)孵育，若標本中含有抗-HCV抗

6、體，則該抗體與微孔內(nèi)抗原形成抗原抗體復合物，加入酶結(jié)合物后酶結(jié)合物連接至抗原抗體復合物上，在TMB底物參與反應的情況下會產(chǎn)生顯色反應［2】。當所檢測樣本吸光度值大于cottoff值5倍吋判斷為陽性，當吸光度值介于cottoff值3.8?5倍之間吋，化學發(fā)光試驗如果為陽性則判斷為陽性［3】。當所檢測樣本吸光度值小于cottoff值時可判定為陰性。雖然0前EUSA法檢測血清丙肝抗體的臨床應用較為廣泛，但也存在著檢驗結(jié)果假陽性的問題，因此值得臨床關(guān)注，以進一步分析原因，探討奮效的解決對策。影響ELISA法檢測血清丙肝抗體結(jié)

7、果假陽性的因素較多，主要可為標本內(nèi)物質(zhì)干擾以及檢驗過程中的操作因素。標本中的干擾物質(zhì)主要包括類風濕因子、補體、非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等。高免疫球蛋白血癥患者血清中存在濃度相對較高的非特異性IGG,因此檢驗結(jié)果可能會出現(xiàn)假陽性。檢驗過程中的操作因素對于假陽性結(jié)果也會產(chǎn)生一定的影響，標本溶血、細菌污染、標本凝固不全，試劑盒抗原不純也容易使得檢驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性［4】。標本加樣時間過長，可能使加樣后在恒溫箱的等待吋間相對過長，使得檢測結(jié)果為陽性。檢驗過程中使用的洗板針被堵塞，抽吸不充分，或洗板機內(nèi)洗液量不

8、足也可能導致假陽性［5］。此外ELISA法檢測血清丙肝抗體假陽性還會受到加樣、反應溫度、反應吋間、洗滌徹底性等諸多因素的影響。筆者認為為進一步降低EUSA法檢測血清丙肝抗體的假陽率，應做好質(zhì)控工作，檢驗員認真仔細的對待每?一份樣本，嚴格按照說明書進行檢驗操作。加酶試劑吋不要滴出孔外，如冇用吸水紙輕拭吸干，加樣后加貼封片及吋放入恒溫箱，保證洗板針