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《影響elisa法檢測(cè)丙肝抗體出現(xiàn)假陽(yáng)性的因素分析》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、影響ELISA法檢測(cè)丙肝抗體出現(xiàn)假陽(yáng)性的因素分析【】目的:探討酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)丙肝抗體(HCV-Ab)過(guò)程中存在假陽(yáng)性的原因及解決方法。方法:回顧性統(tǒng)計(jì)分析了36例用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽(yáng)性血清標(biāo)本,再采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法定量檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證試驗(yàn),確定ELISA方法的假陽(yáng)性率,并分析影響ELISA方法出現(xiàn)假陽(yáng)性的因素及其解決方法。結(jié)果:ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽(yáng)性血清標(biāo)本用PCR法檢測(cè)HCV-RNA復(fù)檢后28例仍為陽(yáng)性,8例陰性,表明以PCR檢測(cè)HCV-RNA方法為準(zhǔn),ELISA法有77.8%的真陽(yáng)性率,有22.2%的假陽(yáng)性率。
2、影響因素除了方法學(xué)、試劑盒本身之外,還有標(biāo)本處理、操作不當(dāng)?shù)榷喾N因素。結(jié)論:多種因素可能會(huì)導(dǎo)致ELISA法檢測(cè)丙肝抗體出現(xiàn)假陽(yáng)性,除了嚴(yán)格操作、做好質(zhì)控外,對(duì)可疑的假陽(yáng)性的標(biāo)本一定要認(rèn)真復(fù)測(cè),最好采用PCR檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證。 【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA);丙肝抗體(HCV-Ab);聚合酶鏈反應(yīng)(PCR);假陽(yáng)性;因素 【】R156.3【】B【】1005-0515(2011)12-0206-02 丙型肝炎(HepatitisC,簡(jiǎn)稱丙肝)是有丙型肝炎病毒(HCV)引起的危害廣大人群肝臟健康的一種傳染性疾病,目前臨床上把檢測(cè)患者血清丙肝抗體(HCV-Ab)做
3、為診斷丙肝的主要依據(jù),酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)因其靈敏度高、特異性強(qiáng),是進(jìn)行HCV-Ab的主要檢測(cè)方法之一[1],但實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用ELISA法檢測(cè)丙肝抗體有許多因素可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果[2],為此本文就回顧性統(tǒng)計(jì)分析了我院三年間35例用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽(yáng)性血清標(biāo)本,再采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法將ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證試驗(yàn)復(fù)檢的結(jié)果,現(xiàn)報(bào)道如下: 1資料與方法 1.1一般資料:35例血清標(biāo)本均來(lái)自2008年6月~2011年6月我院肝病科門診和住院患者?! ?.2方法 1.2.1儀器與試劑:HCV-RNA使用美國(guó)ABI
4、7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀,測(cè)定試劑由上??迫A生物技術(shù)有限公司提供;HCV-Ab使用北京普朗新技術(shù)公司酶免儀以及配套洗板機(jī),試劑由上??迫A生物技術(shù)有限公司提供。 1.2.2檢測(cè)方法:抽取患者空腹靜脈血3-5ml,離心分離血清后1-2h內(nèi)先用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab,篩查出采用同種方法檢測(cè)3次仍為弱陽(yáng)性的血清標(biāo)本,再用聚合酶鏈反應(yīng)法將ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab檢測(cè)HCV-RNA加以證實(shí)。 1.2.3質(zhì)控:所有試劑均在有效期內(nèi),全部?jī)x器、設(shè)備運(yùn)行狀況良好,每日質(zhì)控結(jié)果、每批測(cè)定陰陽(yáng)對(duì)照均在可信范圍,HCV-Ab每次參加河南省臨檢中心質(zhì)控合格。 2結(jié)果 三年
5、間36例用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽(yáng)性血清標(biāo)本,再采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證試驗(yàn)復(fù)檢的結(jié)果顯示28例仍為陽(yáng)性,8例陰性,表明以PCR檢測(cè)HCV-RNA方法為準(zhǔn),ELISA法有77.8%的真陽(yáng)性率,有22.2%的假陽(yáng)性率。 3討論 目前,確定和臨床廣泛應(yīng)用的HCV感染診斷方法有兩大類:檢測(cè)患者血清HCV-Ab和HCV-RNA,雖然最近也發(fā)展了丙肝抗原(HCV-Ag)檢測(cè)技術(shù),但尚未得到廣泛應(yīng)用。對(duì)血清(或者血漿)HCV-RNA的檢測(cè)是目前唯一直接揭示存在的使用方法,但PCR也存在著技術(shù)復(fù)雜,要求特殊設(shè)備、費(fèi)用高等缺點(diǎn),難以在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。
6、血清HCV-Ab的檢測(cè)主要有膠體金(GICA)和酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法,GICA法雖然快捷、方便,但存在靈敏度低,重復(fù)性差,不能提供準(zhǔn)確的確定界限值的標(biāo)準(zhǔn)品,不能進(jìn)行質(zhì)控工作等缺點(diǎn),僅可以做為初步篩查試驗(yàn)[3],而ELISA法具有較高靈敏度、特異性強(qiáng)、可進(jìn)行定量和半定量測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)成為檢測(cè)HCV感染的主要方法。 導(dǎo)致ELISA法檢測(cè)血清HCV-Ab出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因多數(shù)報(bào)道認(rèn)為[4-7]易受加樣、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、洗滌徹底性等諸多因素的影響,根據(jù)我們工作體會(huì)認(rèn)為以下幾個(gè)方面是出現(xiàn)假陽(yáng)性主要因素:標(biāo)本溶血、被細(xì)菌污染、貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)和標(biāo)本凝固不全等標(biāo)本處理問(wèn)題;試劑盒的抗原不純、采
7、用多克隆抗體和酶結(jié)合物純度低等試劑盒本身問(wèn)題;加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)造成加樣后放入恒溫箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng),加樣后孔壁上貼有微小血塊加樣等問(wèn)題;洗板針堵塞,抽吸不完全,洗液量不足,洗板次數(shù)少等洗板問(wèn)題。 總之,影響ELISA法檢測(cè)血清HCV-Ab出現(xiàn)假陽(yáng)性因素除了方法學(xué)、試劑盒本身之外,還有標(biāo)本處理、操作不當(dāng)?shù)榷喾N因素,因此,我們檢驗(yàn)人員在工作中應(yīng)嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,認(rèn)真對(duì)待每一份標(biāo)本,一定要做好檢驗(yàn)前、檢驗(yàn)中、檢驗(yàn)后質(zhì)控,盡可能降低人