影響elisa法檢測(cè)丙肝抗體出現(xiàn)假陽(yáng)性的因素分析

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1、影響ELISA法檢測(cè)丙肝抗體出現(xiàn)假陽(yáng)性的因素分析【】目的：探討酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)丙肝抗體（HCV-Ab）過(guò)程中存在假陽(yáng)性的原因及解決方法。方法：回顧性統(tǒng)計(jì)分析了36例用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽(yáng)性血清標(biāo)本，再采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法定量檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證試驗(yàn)，確定ELISA方法的假陽(yáng)性率，并分析影響ELISA方法出現(xiàn)假陽(yáng)性的因素及其解決方法。結(jié)果:ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽(yáng)性血清標(biāo)本用PCR法檢測(cè)HCV-RNA復(fù)檢后28例仍為陽(yáng)性，8例陰性，表明以PCR檢測(cè)HCV-RNA方法為準(zhǔn)，ELISA法有77.8％的真陽(yáng)性率，有22.2％的假陽(yáng)性率。

2、影響因素除了方法學(xué)、試劑盒本身之外，還有標(biāo)本處理、操作不當(dāng)?shù)榷喾N因素。結(jié)論:多種因素可能會(huì)導(dǎo)致ELISA法檢測(cè)丙肝抗體出現(xiàn)假陽(yáng)性，除了嚴(yán)格操作、做好質(zhì)控外，對(duì)可疑的假陽(yáng)性的標(biāo)本一定要認(rèn)真復(fù)測(cè)，最好采用PCR檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證。　　【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）；丙肝抗體（HCV-Ab）；聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）；假陽(yáng)性；因素　　【】R156.3【】B【】1005-0515(2011)12-0206-02　　　　丙型肝炎（HepatitisC，簡(jiǎn)稱丙肝）是有丙型肝炎病毒（HCV）引起的危害廣大人群肝臟健康的一種傳染性疾病，目前臨床上把檢測(cè)患者血清丙肝抗體（HCV-Ab）做

3、為診斷丙肝的主要依據(jù)，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）因其靈敏度高、特異性強(qiáng)，是進(jìn)行HCV-Ab的主要檢測(cè)方法之一[1]，但實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用ELISA法檢測(cè)丙肝抗體有許多因素可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果[2],為此本文就回顧性統(tǒng)計(jì)分析了我院三年間35例用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽(yáng)性血清標(biāo)本，再采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法將ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證試驗(yàn)復(fù)檢的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下：　　1資料與方法　　1.1一般資料:35例血清標(biāo)本均來(lái)自2008年6月～2011年6月我院肝病科門診和住院患者?！　?.2方法　　1.2.1儀器與試劑:HCV-RNA使用美國(guó)ABI

4、7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀，測(cè)定試劑由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供；HCV-Ab使用北京普朗新技術(shù)公司酶免儀以及配套洗板機(jī)，試劑由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供。　　1.2.2檢測(cè)方法:抽取患者空腹靜脈血3-5ml，離心分離血清后1-2h內(nèi)先用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab，篩查出采用同種方法檢測(cè)3次仍為弱陽(yáng)性的血清標(biāo)本，再用聚合酶鏈反應(yīng)法將ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab檢測(cè)HCV-RNA加以證實(shí)。　　1.2.3質(zhì)控:所有試劑均在有效期內(nèi)，全部?jī)x器、設(shè)備運(yùn)行狀況良好，每日質(zhì)控結(jié)果、每批測(cè)定陰陽(yáng)對(duì)照均在可信范圍，HCV-Ab每次參加河南省臨檢中心質(zhì)控合格。　　2結(jié)果　　三年

5、間36例用ELISA方法檢測(cè)的HCV-Ab弱陽(yáng)性血清標(biāo)本，再采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法檢測(cè)HCV-RNA進(jìn)行確證試驗(yàn)復(fù)檢的結(jié)果顯示28例仍為陽(yáng)性，8例陰性，表明以PCR檢測(cè)HCV-RNA方法為準(zhǔn)，ELISA法有77.8％的真陽(yáng)性率，有22.2％的假陽(yáng)性率。　　3討論　　目前，確定和臨床廣泛應(yīng)用的HCV感染診斷方法有兩大類：檢測(cè)患者血清HCV-Ab和HCV-RNA，雖然最近也發(fā)展了丙肝抗原（HCV-Ag）檢測(cè)技術(shù)，但尚未得到廣泛應(yīng)用。對(duì)血清（或者血漿）HCV-RNA的檢測(cè)是目前唯一直接揭示存在的使用方法，但PCR也存在著技術(shù)復(fù)雜，要求特殊設(shè)備、費(fèi)用高等缺點(diǎn)，難以在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。

6、血清HCV-Ab的檢測(cè)主要有膠體金(GICA)和酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法，GICA法雖然快捷、方便，但存在靈敏度低，重復(fù)性差，不能提供準(zhǔn)確的確定界限值的標(biāo)準(zhǔn)品，不能進(jìn)行質(zhì)控工作等缺點(diǎn)，僅可以做為初步篩查試驗(yàn)[3]，而ELISA法具有較高靈敏度、特異性強(qiáng)、可進(jìn)行定量和半定量測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)成為檢測(cè)HCV感染的主要方法。　　導(dǎo)致ELISA法檢測(cè)血清HCV-Ab出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因多數(shù)報(bào)道認(rèn)為[4-7]易受加樣、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、洗滌徹底性等諸多因素的影響，根據(jù)我們工作體會(huì)認(rèn)為以下幾個(gè)方面是出現(xiàn)假陽(yáng)性主要因素：標(biāo)本溶血、被細(xì)菌污染、貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)和標(biāo)本凝固不全等標(biāo)本處理問(wèn)題；試劑盒的抗原不純、采

7、用多克隆抗體和酶結(jié)合物純度低等試劑盒本身問(wèn)題；加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)造成加樣后放入恒溫箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，加樣后孔壁上貼有微小血塊加樣等問(wèn)題；洗板針堵塞，抽吸不完全，洗液量不足，洗板次數(shù)少等洗板問(wèn)題。　　總之，影響ELISA法檢測(cè)血清HCV-Ab出現(xiàn)假陽(yáng)性因素除了方法學(xué)、試劑盒本身之外，還有標(biāo)本處理、操作不當(dāng)?shù)榷喾N因素，因此，我們檢驗(yàn)人員在工作中應(yīng)嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，認(rèn)真對(duì)待每一份標(biāo)本，一定要做好檢驗(yàn)前、檢驗(yàn)中、檢驗(yàn)后質(zhì)控，盡可能降低人