hiv快速檢測(cè)方法及應(yīng)用

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1、HIV快速檢測(cè)方法及應(yīng)用甘肅省疾病預(yù)防控制中心二○一一年四月白莉HIV抗體檢測(cè)的主要技術(shù)依據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》（2009年修訂版）09.9《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》04.11《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB-19489-2004）04.10《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法》06.6HIV抗體檢測(cè)HIV抗體檢測(cè)試驗(yàn)分為篩查試驗(yàn)（包括初篩和復(fù)檢）和確認(rèn)試驗(yàn)。檢測(cè)抗-HIV抗體是HIV/AIDS診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo)，也是控制HIV傳播和AIDS流行的重要手段?？?HIV抗體測(cè)定作為血清學(xué)診斷要求準(zhǔn)確、可靠，故必須經(jīng)篩查、復(fù)檢試驗(yàn)和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)三個(gè)步驟。初篩實(shí)驗(yàn)方法主要有：

2、酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）、明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）、免疫層析試驗(yàn)等。確認(rèn)試驗(yàn)主要用免疫印跡試驗(yàn)（Westernblot,WB）、免疫熒光試驗(yàn)（IFA）?？焖贆z測(cè)試驗(yàn)（RT）明膠顆粒凝集（ParticleAgglutination,PA)免疫滲漏（Immunoconcentration,Flowthrough,FT)免疫層析（Immunochromatograpy,lateralflow,IF)*用最新快速HIV試劑檢測(cè)HIV抗體比第三代EIA晚2－8天目前在國(guó)內(nèi)批準(zhǔn)注冊(cè)的國(guó)外進(jìn)口試劑有：DetermineHIV1/2（ABBOTT，雅培）、韓國(guó)SD、麥美華、中新科炬等一般

3、10-30min內(nèi)出結(jié)果，超過(guò)60min判斷結(jié)果無(wú)效。2003年國(guó)內(nèi)已有產(chǎn)品被批準(zhǔn)，萬(wàn)泰、科華、艾康等快速檢測(cè)試驗(yàn)（RT）明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）PA是一種簡(jiǎn)便的HIV血清抗體檢測(cè)方法。先將樣品稀釋，然后分別加入經(jīng)抗原致敏的和未致敏的明膠顆粒，混勻后保溫（一般為室溫）2H，觀察結(jié)果。操作簡(jiǎn)便，無(wú)需特殊儀器設(shè)備，適合對(duì)少量標(biāo)本的檢測(cè)。血清中有HIV抗體存在時(shí)，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結(jié)果。明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA試劑（AFDHIV1/2PA）,可用于HIV1/2的篩查.HIV-1、H

4、IV-2抗原分別致敏的PA試劑（AERODIA-HIV-1/2）可用于區(qū)分HIV-1型和HIV-2型。缺點(diǎn):判定結(jié)果用肉眼觀察，結(jié)果無(wú)法保存。目前為了保存試驗(yàn)結(jié)果，有條件的實(shí)驗(yàn)室可配備數(shù)碼相機(jī)，記錄每次試驗(yàn)結(jié)果。PA定性試驗(yàn)C對(duì)照顆粒S致敏顆粒M陰性顆粒膠體硒法(免疫層析法)在使用試劑前必須仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū),需嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行,否則無(wú)法保證可靠的結(jié)果原理:以硝酸纖維膜(玻璃纖維膜)為載體。是一種用免疫層析法定性測(cè)定血樣中HIV1/2抗體,加樣本入反應(yīng)條,當(dāng)樣品遷移通過(guò)結(jié)合物包被處,與硒膠體-抗原結(jié)合物重組結(jié)合,此混合物繼續(xù)遷移通過(guò)固相包被的合成肽和重組抗原的病人結(jié)果窗口如果

5、樣品中含有HIV1/2抗體,抗體將會(huì)與硒膠體-抗原結(jié)合,并在病人窗口處被固相包被的合成肽和重組抗原所捕捉固定,形成一條紅線;如果樣品中不含有HIV1/2抗體,硒膠體-抗原結(jié)合物將會(huì)通過(guò)病人窗口而不與固相包被的合成肽和重組抗原結(jié)合,則沒(méi)有一條紅線形成;為了確保結(jié)果有效,在反應(yīng)條中含有質(zhì)控條帶。膠體硒法(免疫層析法)樣品墊:加入血漿,血清或全血樣品.紅細(xì)胞在此遷移過(guò)程中被去除連接物墊:含分析特異性試劑結(jié)合的硒標(biāo),為一種肉眼可見(jiàn)的紅色信號(hào),被分析物和硒標(biāo)特異性試劑在此反應(yīng)結(jié)合病人條:固定的含特異性分析試劑,任何與硒標(biāo)特異性試劑結(jié)合的分析復(fù)合物在此被結(jié)合固定,形成三文治結(jié)合物,肉眼

6、可見(jiàn)的紅色線條說(shuō)明有陽(yáng)性反應(yīng)質(zhì)控條:固定的含捕捉硒標(biāo)物的特異性試劑,不管樣品中有無(wú)被檢測(cè)物都應(yīng)出現(xiàn)紅色線條.控制測(cè)試結(jié)果的有效性膠體硒法(免疫層析法)撕下所需的測(cè)試紙條數(shù),撕下表面保護(hù)膜膠體硒法(免疫層析法)血清/血漿樣品加50ul樣品于樣品墊中15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果膠體硒法(免疫層析法)全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果膠體硒法(免疫層析法)病人條質(zhì)控條膠體硒法(免疫層析法)對(duì)篩查試驗(yàn)結(jié)果的解釋篩查實(shí)驗(yàn)的目的是檢出所有的陽(yáng)性者，在得到一個(gè)篩查試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，要想到它極有可能是真正的陽(yáng)性，但也有假陽(yáng)性的可能出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因很多，如

7、風(fēng)濕病、病毒性肝炎、大量溶血的樣品、不用EDTA抗凝的全血血漿樣品等篩查試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報(bào)告所有篩查試驗(yàn)陽(yáng)性的標(biāo)都應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢篩查試驗(yàn)陽(yáng)性的樣品，需填寫(xiě)“HIV抗體復(fù)檢檢測(cè)單”，必須有檢測(cè)人，一名具有中級(jí)以上技術(shù)職稱的復(fù)核人審核簽字，送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢，再轉(zhuǎn)送艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室穩(wěn)定，可室溫長(zhǎng)期保存。試驗(yàn)不需任何設(shè)備，迅速、簡(jiǎn)便、特異性較好，敏感性約相當(dāng)于中度敏感的ELISA，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診個(gè)體檢測(cè)。已有被SFDA批準(zhǔn)注冊(cè)的進(jìn)口試劑和國(guó)內(nèi)產(chǎn)品。一般可在10?30mi