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《中藥止哮平喘方抗哮喘豚鼠模型氣道炎癥的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、中藥止哮平喘方抗哮喘豚鼠模型氣道炎癥的實(shí)驗(yàn)研究：胡作為，周電光，周燕萍，王鵬【關(guān)鍵詞】止哮平喘方 摘要：【目的】探討中藥止哮平喘方(主要由法半夏、瓜蔞皮、薤白、白芍、柴胡、黃芩、麻黃、枳殼、射干、甘草等中藥組成)對(duì)哮喘豚鼠模型氣道炎癥的影響?！痉椒ā繌?fù)制卵蛋白致敏哮喘模型，觀察支氣管及肺的病理學(xué)改變；測(cè)量全血及肺泡灌洗液(BALF)中血細(xì)胞計(jì)數(shù)；免疫組織化學(xué)法測(cè)定外周血單核細(xì)胞(PBMC)中CD＋４、CD＋８T細(xì)胞的含量。【結(jié)果】病理研究顯示哮喘模型組豚鼠氣道周圍大量炎性細(xì)胞浸潤，以嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)和淋巴細(xì)胞為主。哮喘模型組全血及BALF中炎性細(xì)胞數(shù)顯著高
2、于正常組(Ｐ＜001)；中藥大劑量組和西藥對(duì)照組炎性細(xì)胞數(shù)均顯著降低(Ｐ＜005或Ｐ＜001)。哮喘模型組CD＋４T細(xì)胞高于正常組(Ｐ＜005)；中藥大劑量組和西藥對(duì)照組CD＋４T細(xì)胞均有下降(與哮喘模型組比較，Ｐ＜005)?！窘Y(jié)論】中藥止哮平喘方能降低氣道及外周血炎性細(xì)胞的數(shù)量，具有抗氣道炎癥的作用；降低CD＋４細(xì)胞數(shù)量，相對(duì)增加CD＋8T細(xì)胞，使CD＋4/CD＋8恢復(fù)正常狀態(tài)，從而起到調(diào)節(jié)其紊亂的免疫功能狀態(tài)的作用，這可能是止哮平喘方抗氣道炎癥的作用機(jī)理之一。 關(guān)鍵詞：止哮平喘方/藥理學(xué)；哮喘/病理學(xué)；哮喘/免疫學(xué)；嗜酸性細(xì)胞；CD4陽性T淋巴細(xì)胞；CD8陽性T
3、淋巴細(xì)胞；瓜蔞薤白半夏湯/藥理學(xué)；小柴胡湯/藥理學(xué)；芍藥甘草湯/藥理學(xué) 支氣管哮喘是以嗜酸細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等浸潤為主的氣道慢性變態(tài)反應(yīng)性炎癥，其中淋巴細(xì)胞尤其是T淋巴細(xì)胞活化起關(guān)鍵作用?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)哮喘的治療仍然首選糖皮質(zhì)激素全身或局部用藥，但長期應(yīng)用副作用明顯。中藥止哮平喘方是王鵬教授多年診治支氣管哮喘的經(jīng)驗(yàn)方，有寬胸理氣、通陽散結(jié)、化痰解痙等作用，臨床療效確切。為探討支氣管哮喘氣道炎癥的病理學(xué)特征和止哮平喘方抗氣道炎癥的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用全血及肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞學(xué)分析及免疫組織化學(xué)方法，評(píng)價(jià)中藥止哮平喘方對(duì)哮喘氣道炎癥的影響及對(duì)TH1/TH2型細(xì)胞的作用
4、?！ ?材料與方法 11主要試劑及儀器 卵蛋白由Sigma公司出品(進(jìn)口分裝)；016mol/L戊巴比妥鈉；肝素用生理鹽水配制成1250U/mL的溶液；小鼠抗大鼠SABC試劑盒(即用型)、鼠抗CD＋4及CD＋8多克隆抗體、DAB顯色試劑盒均為武漢博士德生物工程公司產(chǎn)品；402超聲霧化器，上海四菱醫(yī)療機(jī)械廠生產(chǎn)?！ ?2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 清潔級(jí)健康豚鼠，體重(200±20)g，由同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心提供。檢疫1周后，豚鼠隨機(jī)分為①正常對(duì)照組、②哮喘模型組、③西藥對(duì)照組、④中藥小劑量組、⑤中藥大劑量組，共5組，每組10只(雌雄分籠飼養(yǎng))?！ ?3造模方法 以卵蛋
5、白致敏和攻擊加以復(fù)制。實(shí)驗(yàn)第1天，配制100g/L卵蛋白生理鹽水，豚鼠腹腔注射1mL以致敏；第15天將致敏豚鼠置于14L透明玻璃鐘罩內(nèi)，給予10g/L卵蛋白生理鹽水超聲霧化吸入(霧化量由小到大)15～20s，后自然吸入15～20s，出現(xiàn)呼吸頻率加快、點(diǎn)頭呼吸、咳嗽、抽搐等癥狀時(shí)為引喘成功。以后每隔1天以10g/L卵蛋白生理鹽水誘喘。按最大霧量，自然吸入15～30s，使哮喘反復(fù)發(fā)作(每次誘喘之前，每只豚鼠均腹腔注射苯海拉明5mg/kg)。共4次。正常對(duì)照組以等量生理鹽水進(jìn)行腹腔注射和霧化，方法同上?！ ?4藥物制備及給藥方法 止哮平喘方(由法半夏10g、瓜蔞皮10g、
6、薤白10g、白芍30g、柴胡10g、黃芩10g、麻黃10g、枳殼10g、甘草10g和射干10g組成)由湖北中醫(yī)學(xué)院中藥室制備(水煮醇沉法)，含生藥2g/mL；地塞米松片，075mg/片，在第1次誘喘24h后，即從第16天開始按1mg・kg－１胃飼給藥；中藥小劑量組止哮平喘方6g・kg－１；中藥大劑量組止哮平喘方24g・kg－１；哮喘模型組及正常對(duì)照組均飼以等容量生理鹽水。共治療8d。 15標(biāo)本采集及檢測(cè) 151標(biāo)本采集 稱體重，016mol/L戊巴比妥鈉1mL/kg腹腔內(nèi)注射，麻醉。常規(guī)消毒，心臟采血，肝素抗凝，血細(xì)胞計(jì)
7、數(shù)測(cè)定細(xì)胞總數(shù)，涂片、染色，作細(xì)胞學(xué)分析。摘取豚鼠肺臟，用無尖針頭注射器置于氣管分叉處，緩慢注入生理鹽水(37℃)2mL，保留30s后抽出，重復(fù)4次。每例收集肺泡灌洗液6～7mL(回收率＞85%)，-4℃儲(chǔ)存，1h內(nèi)作細(xì)胞分離。BALF于1500r/min離心10min，沉淀細(xì)胞用1mLHanks液重懸。取01mL測(cè)定細(xì)胞總數(shù)；取02mL涂片，C)的制備和激活 稱體重，016mol/L戊巴比妥鈉1mL/kg麻醉豚鼠。常規(guī)消毒，心臟采血，抗凝。用淋巴細(xì)胞分層液分離淋巴細(xì)胞，用完全RPMI1640定容細(xì)胞并記數(shù)。臺(tái)盼藍(lán)染液檢查PBMC活性，活性超過95
