探討黃芪、赤芍對小鼠免疫性肝損傷的保護作用

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1、探討黃芪、赤芍對小鼠免疫性肝損傷的保護作用　肝臟擔負著物質(zhì)代謝和解毒的功能，是機體重要的器官，因而也易受到病毒、細菌、酒精等攻擊，誘發(fā)肝臟損傷。肝損傷時肝枯否細胞的激活和各種炎癥介質(zhì)、細胞因子和氧自由基、一氧化氮等物質(zhì)大量產(chǎn)生，導致炎癥反應的發(fā)生。2006年選擇毒性低，價廉的常用傳統(tǒng)中藥黃芪與赤芍對免疫性肝損傷保護作用進行研究。黃芪活性成分黃芪甙具有抑制脂氧化酶,減少脂多糖(LPS)的生成,提高肝臟谷胱苷肽(GSH)含量，抗自由基，調(diào)節(jié)代謝，保護線粒體,尤其在調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗病毒、改善肝臟供血等方面有

2、重要作用[1，2]。有報道赤芍對乙型肝炎患者肝臟損害有保護作用[3]。單藥黃芪及赤芍對動物免疫性肝損傷的保護作用國內(nèi)均有報道，黃芪與赤芍二者聯(lián)合用藥的效果及機制未見報道，本研究使用卡介菌（BCG）和脂多糖（LPS）誘導小鼠免疫性肝損傷模型，選擇血清酶學測定及超氧化物歧化酶（SOD）、肝臟脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)為測定指標，觀察黃芪注射液、赤芍注射液聯(lián)合應用對免疫性肝損傷的保護作用。　?。辈牧吓c方法　?。保辈牧稀　?.1.1動物　　昆明系雄性小鼠，5～8周齡，體重（２０±２）g，由黑龍江

3、中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供?！　?.1.2試劑　　BCG由衛(wèi)生部生物制品研究所提供，LPS購自Sigma公司，黃芪注射和赤芍注射液為成都地奧九泓制藥廠藥品，SOD、MDA試劑盒為南京建成生物工程公司產(chǎn)品，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）試劑購于北京中生生物工程高科技公司?！　?.1.3儀器　　SpectraMAX190酶標儀、日立7600-020全自動生化分析儀。　　1.2方法　　1.2.1分組　　60只小鼠隨機分為5組，對照組、模型組、黃芪組、赤芍組、黃芪赤芍聯(lián)合組。對照

4、組腹腔注射性理鹽水15ml/kg，模型組和三個給藥組建立免疫性肝損傷模型。　　1.2.2造?！　∈缶?jīng)尾靜脈注射BCG1mg(0.2ml)，3h后，給藥組分別腹腔注射相應藥物(黃芪15ml/kg，或赤芍15ml/kg，或黃芪和赤芍各7ml/kg），連續(xù)10d。最后1次給藥3h后，經(jīng)尾靜脈注射LPS10μg（0.2ml），禁食不禁水，5h后，眼眶取血，分離血清，同時脫頸椎處死小鼠，迅速取出肝右葉組織制備成勻漿測MDA、SOD?！?.3血清酶活性測定　　血清ALT，AST，LDH活性測定用日立7600-

5、020全自動生化分析儀測定；MDA和SOD的含量測定，嚴格按試劑盒說明書操作。　　1.4統(tǒng)計學處理　　實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行方差分析，實驗數(shù)據(jù)以x±s表示。　　2結(jié)果　　2.1血清ALT、AST及LDH模型組與對照組比較，血清中ALT、AST和LDH升高，表明造模型成功。三個用藥組與模型組比較各項指標均有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01），說明黃芪注射液與赤芍注射液均能減少肝細胞內(nèi)酶的逸出，對肝細胞有較明顯的保護作用；黃芪組強于赤芍組（P＜0.01）,聯(lián)合組作用更顯著，

6、見表1。表1各組小鼠血清ALT、AST及LDH水平（略）注：與對照組比較，（1）P＜0.05，（2）P＜0.01；與模型組比較，（3）P＜0.05，（4）P＜0.01；與黃芪組比較，（5）P＜0.05；與赤芍組比較，（6）P＜0.05，（7）P＜0.01?！　?.2肝組織SOD及MDA模型組小鼠肝勻漿SOD水平低于對照組（P＜0.01），MDA含量高于對照組（P＜0.05），表明造模成功。黃芪注射液與赤勺注射液均能提高肝組織SOD活力，減少MDA含量，見表2。表2各組小鼠肝組織SOD及MDA水平（略）注：

7、與對照組比較，（1）P＜0.05，（2）P＜0.01；與模型組比較，（3）P＜0.05，（4）P＜0.01；與黃芪組比較（5）P＜0.01；與赤芍組比較（6）P＜0.05，（7）P＜0.01?！　?討論　　多數(shù)學者認為慢性病毒性肝炎不是肝炎病毒對肝細胞的直接損傷，而是肝炎病毒侵入肝細胞后，激發(fā)人體免疫應答引起免疫性肝損傷。微量的BCG和LPS可誘導小鼠免疫性肝損傷模型類似于人類肝炎發(fā)生的病理生理過程，BCG首先致敏T淋巴細胞，特別是大量致敏肝內(nèi)枯否細胞，使巨噬細胞聚集于肝臟，在注射LPS后激活致敏狀態(tài)的細

8、胞，使其釋放大量細胞因子，如一氧化氮、腫瘤壞死因子(TNF)、白細胞介素(IL)、自由基和白三烯等，進一步引起肝臟免疫損傷，因此是篩選治療肝病藥物較為理想的模型之一[7]?！　C體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生自由基，自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，如MDA，它能改變酶的功能，引起基因調(diào)控及表達錯誤，最終導致肝細胞變性、壞死。因此，MDA是體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應終產(chǎn)物，其水平的改變能間接地反映由于自