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《人參皂苷rg1對(duì)體外培養(yǎng)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞增殖作用的影響論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、人參皂苷Rg1對(duì)體外培養(yǎng)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞增殖作用的影響論文.freelol/L)神經(jīng)球數(shù)明顯增加。選定人參皂苷Rg140、4、0.4μmol/L作為高、中、低劑量進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究,與對(duì)照組相比,人參皂苷Rg1高、中、低劑量組神經(jīng)球生成數(shù)目明顯增加。結(jié)論人參皂苷Rg1可以明顯增加神經(jīng)球生成數(shù)目,具有促進(jìn)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞體外增殖的作用?！娟P(guān)鍵詞】人參皂苷Rg1;胚胎神經(jīng)干細(xì)胞;增殖Abstract：ObjectiveToexploretheeffectofginsenosideRg1onproliferationofneurals
2、temcells(NSCs)invitro.MethodsTheNSCsculturesthebrainofembryonicday16SDrat.PrimitiveNSCsmunocytochemical(ICC)stainingofNestin.TheICCstainingofBrdUiteddilutionmethod,theeffectofginsenosideRg1ontheproliferationofNSCsol/L)ofginsenosideRg1couldpromotetheproliferationofN
3、SCsinvitro.paredbersofnerurospheresofthethreedosageginsenosideRg1groups(40,4,0.4μmol/L)otetheproliferationofNSCsinvitro.Keybryonicneuralstemcells;proliferation神經(jīng)干細(xì)胞(neuralstemcell,NSCs)具有自我更新能力和多向分化潛能1,在神經(jīng)系統(tǒng)疾病或損傷的修復(fù)中起著重要的作用。研究調(diào)節(jié)NSCs增殖分化的影響因素,誘導(dǎo)其增殖和定向分化為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)和退
4、行性變的治療帶來(lái)了希望。因此,NSCs的體外培養(yǎng)、增殖、誘導(dǎo)定向分化的研究已成為神經(jīng)科學(xué)的一個(gè)研究熱點(diǎn)。本研究對(duì)體外培養(yǎng)胎鼠NSCs進(jìn)行增殖鑒定,觀察了人參皂苷Rg1對(duì)NSCs增殖能力的影響,為開(kāi)發(fā)對(duì)NSCs具有保護(hù)效能的治療藥物、探索神經(jīng)系統(tǒng)疾病新的治療方法打下基礎(chǔ)。1材料與方法1.1培養(yǎng)基、試劑及藥物DMEM/F12(1∶1)培養(yǎng)基(Lot.NoATB31223,HYCLONE,U.S.A);HBSS液(無(wú)鈣離子和鎂離子,Lot.No01118197,LONZA,U.S.A);B27添加物(Lot.No311624,GI
5、BCO/INVITROGEN);青霉素-鏈霉素溶液(雙抗,100×)(每毫升含有10000U青霉素以及10mg鏈霉素,Cat.NoP4333,SIGMA);重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF,Cat.NoCYT-218,PROSPEC-TANY,ISRAEL);人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)(Lot.No3860501000,STRATHMANNBIOTEC,GERMANY);人參皂苷Rg1、丹酚酸B(天津中一制藥)。1.2大鼠胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)及傳代取孕齡16天孕鼠,脫臼處死,75%乙醇浸泡消毒3～5min,無(wú)菌條件下打
6、開(kāi)腹腔,取出串珠狀子宮,浸泡于冷HBSS液中。取出胎鼠,置于另一含有冷HBSS液的培養(yǎng)皿內(nèi),小心剝離外層骨膜,取出大腦皮質(zhì)并去除軟腦膜,冷HBSS液漂洗2次后,轉(zhuǎn)移至離心管。加入一定量冷HBSS液后吹打至肉眼看不到明顯組織塊,使液體呈均勻懸濁狀。過(guò)200目(70μm)篩網(wǎng),1000r/min離心8min,棄上清,全培基(含2%B27、20μg/LbFGF、20μg/LEGF的DMEM/F12,1%雙抗)重懸,約3～4個(gè)胎鼠/75cm2的密度種入培養(yǎng)瓶中,37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2～3d半量換液,收集培養(yǎng)液到50mL
7、離心管中,靜置3～5min,然后收集上清(管底約留1～2mL)轉(zhuǎn)入另一離心管,500r/min離心3min。棄約一半上清液,補(bǔ)充入相同量的新鮮的全培基(含1%雙抗,2%B27、20μg/LbFGF、20μg/LEGF的DMEM/F12),重懸種置。約5～9d傳代1次。500r/min離心3min,收集培養(yǎng)的神經(jīng)球,沉淀細(xì)胞用1mL全培基重懸,用23號(hào)(內(nèi)徑0.65mm)注射器輕輕吹打5次,避免產(chǎn)生氣泡,靜置3～5min使未吹散的細(xì)胞沉底。收集上清,管底的細(xì)胞再加1mL繼續(xù)吹打5～8次,收集細(xì)胞補(bǔ)加全培基,以1×105個(gè)/mL
8、的密度全培基重懸種入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。1.3神經(jīng)干細(xì)胞及增殖鑒定采用ABC法進(jìn)行Nestin免疫組化染色鑒定NSCs。染色步驟：蓋玻片放入6孔板內(nèi),每孔加多聚賴(lài)氨酸處理60min;將細(xì)胞懸液接種于多聚賴(lài)氨酸處理過(guò)的蓋玻片的6孔板內(nèi),貼壁生長(zhǎng)2h;4%多聚甲醛固定20min;3%H2O237℃
