川楝子醇提物體外肝細胞毒性研究的論文

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1、川楝子醇提物體外肝細胞毒性研究的論文【摘要】目的:考察川楝子醇提物體外細胞毒性。方法:將川楝子醇提物倍比稀釋后與小鼠肝細胞接觸培養(yǎng),通過顯微鏡觀察其形態(tài),采用mtt法量化細胞毒性,計算相對增殖率。結果:川楝子醇提物對肝細胞的生長抑制作用無統計學差異（p＞0.05），川楝子醇提物肝細胞毒性級別為0級。結論:川楝子醇提物無明顯的肝細胞毒性?！娟P鍵詞】川楝子醇提物;細胞毒性;mtt法川楝子(fructustoosendan)是臨床常用中藥。據《中國藥典》2010年版所載為楝科植物川楝(meliatoosendansieb.etzuc

2、c.)的干燥成熟果實，有肝小毒。本文用mtt法考察川楝子醇提物對肝細胞的毒性程度。1材料與方法1.1材料與試劑。小鼠，1640培養(yǎng)液，小牛血清，噻唑藍，co2恒溫培養(yǎng)箱，酶標儀，顯微鏡。2　實驗方法2.1供試品溶液制備:用含10%血清的1640培養(yǎng)基將供試品稀釋至所需濃度。.2.2細胞接種:用機械分離法，將小鼠肝臟剪碎，研磨，使肝細胞從肝組織上脫落,獲肝細胞，制成單個細胞懸液。用含10%血清的1640培養(yǎng)液種植消化并稀釋，將細胞密度調整為1×106個/ml，接種到96孔培養(yǎng)板，每孔接種200μl細胞懸液。置co2培養(yǎng)箱37℃培

3、養(yǎng)使細胞貼壁24h。2.3mtt法:取8ml供試品，倍比稀釋成6個不同濃度。設細胞對照組和6個不同濃度供試品組（從高到低濃度依次為ⅰ組、ⅱ組、ⅲ組、ⅳ組、ⅴ組、ⅵ組），每組8個復孔。在各孔中分別加入100μl培養(yǎng)液及100μl不同濃度的供試品稀釋液，置co2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)72h。置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)（圖1）。每孔加入mtt溶液50μl，37℃孵育4h。置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)（圖2）。棄去孔內培養(yǎng)基和mtt溶液，再加入dmso200μl，混勻10min，采用酶標儀，在492nm和630nm處分別測定吸光度a值，用各孔a492n

4、m-對應孔a630nm，取平行4孔差值計算各組平均值。按下式計算細胞相對增殖率：細胞相對增殖率（rgr）=a/a0×100%式中：a為供試品組吸光度；a0為細胞對照組吸光度均值。2.4統計方法?！　嶒灁祿捎胹pss11.0統計處理，計量數據a值以（x±s）表示，采用t檢驗進行比較。3結果3.1細胞形態(tài)學觀察。顯微鏡下觀察，肝細胞呈貼壁生長，細胞多呈圓形、三角形、梭形，胞漿豐富，細胞核有單或雙核，呈圓形或橢圓形。在每孔加入mtt溶液37℃孵育4h后,細胞生長密集,其形態(tài)和核相均沒有發(fā)生改變。結果見圖1、圖2。注：與細胞對照組

5、比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.0014結論川楝子乙醇提取物無肝細胞毒性。5討論　　細胞活性和增殖狀況的測定是評價藥物毒性過程不可或缺的步驟。mtt法是最為簡單、迅速和高敏感性的檢測細胞活性與生長增殖的方法。其原理為：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的mtt還原為水不溶性的藍紫色結晶物——甲臜，并沉積在細胞中，而死細胞則無此功能。dmso能溶解細胞中的甲臜，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量，同時也可計算細胞相對增值率（rgr）或抑制率。本實驗結果表明，川楝子醇提物

6、有明顯的促進肝細胞生長增殖作用。rgr與藥物毒性級別的對應關系為：當rgr大于或等于100%時，級別為0級；當rgr在75%~99%時，級別為1級；當rgr在50%~74%時，級別為2級；當rgr在25%~49%時，級別為3級；當rgr在1%~24%時，級別為4級；當細胞無增值率時，級別為5級。本實驗結果顯示，不同濃度供試品rgr值均高于100%?？梢姡ㄩ哟继嵛飳Ω渭毎麩o明顯的毒性。