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1、川楝子醇提物體外肝細胞毒性研究【摘要】目的：考察川楝子醇提物體外細胞毒性。方法將川楝子醇提物倍比稀釋后與小鼠肝細胞接觸培養(yǎng)，通過顯微鏡觀察其形態(tài)，采用MTT法量化細胞毒性，計算相對增殖率。結(jié)果：川楝子醇提物對肝細胞的生長抑制作用無統(tǒng)計學(xué)差異(P〉)，川楝子醇提物肝細胞毒性級別為0級。結(jié)論:川楝子醇提物無明顯的肝細胞毒性?！娟P(guān)鍵詞】川楝子醇提物;細胞毒性;MTT法川楝子(FructusToosendan)是臨床常用中藥。據(jù)《中國藥典》XX年版所載為楝科植物川楝0的干燥成熟果實，有肝小毒。本文用MTT法考察川楝子醇提物對肝細胞的毒性程度。1材料與方法材料與試劑。小鼠，1640培養(yǎng)液，小牛血清，
2、噻哇藍，C02恒溫培養(yǎng)箱，酶標儀，顯微鏡。2實驗方法供試品溶液制備:用含10%血清的1640培養(yǎng)基將供試品稀釋至所需濃度。細胞接種：用機械分離法，將小鼠肝臟剪碎，研磨，使肝細胞從肝組織上脫落，獲肝細胞，制成單個細胞懸液。用含10%血清的1640培養(yǎng)液種植消化并稀釋，將細胞密度調(diào)整為IX106個/ml，接種到96孔培養(yǎng)板，每孔接種200ul細胞懸液。置C02培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)使細胞貼壁24h。法:取8m1供試品，倍比稀釋成6個不同濃度。設(shè)細胞對照組和6個不同濃度供試品組（從高到低濃度依次為I組、II組、III組、IV組、V組、VI組），每組8個復(fù)孔。在各孔中分別加入lOOuL培養(yǎng)液及100u
3、L不同濃度的供試品稀釋液，置C02培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)72h。置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)（圖1）。每孔加入MTT溶液50uL，37°C孵育4h。置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)（圖2）。棄去孔內(nèi)培養(yǎng)基和MTT溶液，再加入DMS0200UL，混勻lOmin,采用酶標儀，在492nm和630nm處分別測定吸光度A值，用各孔A492nm_對應(yīng)孔A630nm，取平行4孔差值計算各組平均值。按下式計算細胞相對增殖率：細胞相對增殖率（RGR）=A/A0X100%式中：A為供試品組吸光度；A0為細胞對照組吸光度均值。統(tǒng)計方法。實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計處理，計量數(shù)據(jù)A值以（X土s）表示，采用t檢驗進行比較。3結(jié)果細胞形態(tài)學(xué)觀察。顯微
4、鏡下觀察，肝細胞呈貼壁生長，細胞多呈圓形、三角形、梭形，胞漿豐富，細胞核有單或雙核，呈圓形或橢圓形。在每孔加入MTT溶液37°C孵育4h后，細胞生長密集，其形態(tài)和核相均沒有發(fā)生改變。結(jié)果見圖1、注：與細胞對照組比較樸＜，W＜,林補＜4結(jié)論川楝子乙醇提取物無肝細胞毒性。5討論細胞活性和增殖狀況的測定是評價藥物毒性過程不可或缺的步驟。MTT法是最為簡單、迅速和高敏感性的檢測細胞活性與生長增殖的方法。其原理為：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶物__甲臜，并沉積在細胞中，而死細胞則無此功能。DMSO能溶解細胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其
5、光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量，同時也可計算細胞相對增值率（RGR）或抑制率。本實驗結(jié)果表明，川楝子醇提物有明顯的促進肝細胞生長增殖作用。RGR與藥物毒性級別的對應(yīng)關(guān)系為：當RGR大于或等于100%時，級別為0級；當RGR在75%99%時，級別為1級；當RGR在50%74%時，級別為2級;當RGR在25%49%時，級別為3級;當RGR在1%24%時，級別為4級；當細胞無增值率時，級別為5級。本實驗結(jié)果顯示，不同濃度供試品RGR值均高于100%?？梢?，川楝子醇提物對肝細胞無明顯的毒性。參考文獻[1]周繼春，楊海燕，徐曉月，何燕.柴胡注射液體外細胞毒性研究[J].藥物分析雜志，XX;30(9)
6、：1809-1812[2]蔣青鋒，陳志良，包杰，劉喜榮，武金寶.銀杏內(nèi)酯納米粒細胞毒性研究[J].中國醫(yī)藥指南，XX;8(24):23-25
