川楝子致小鼠肝毒性時效、量效關(guān)系研究

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1、川楝子致小鼠肝毒性時效、量效關(guān)系研究作者：齊雙巖熊彥紅金若敏【摘要】目的研究川楝子致小鼠肝毒性的時效、量效關(guān)系。方法小鼠灌服不同劑量川楝子，測定其LD50。另取小鼠按不同時間點或不同劑量分組，檢查血清ALT，AST，計算肝、脾、胸腺臟器指數(shù)，并觀察肝組織形態(tài)變化。結(jié)果小鼠灌服川楝子的LD50為200g·kg-1。ALT，AST在給藥后1h達(dá)到高峰，24h可恢復(fù)近正常值。與正常組比較，川楝子81，166g/kg劑量組對肝組織產(chǎn)生明顯損傷，且隨著劑量增大，ALT，AST升高顯著(P<0.05或P<0.0

2、1)。結(jié)論小鼠單次灌服一定劑量川楝子可造成急性肝損傷甚至死亡，并顯示有毒性時效、量效關(guān)系?！娟P(guān)鍵詞】川楝子小鼠肝毒性川楝子FructusToosendan為臨床常用藥?！吨袊幍洹?005年版所載川楝子為楝科植物川楝MeliatoosendanSieb.etZucc.的干燥成熟果實，性味苦寒，有小毒，歸肝、小腸、膀胱經(jīng)，具有疏肝泄熱、行氣止痛、殺蟲等功效，臨床用于治療胸脅、脘腹脹痛、疝氣痛、蟲積腹痛。有關(guān)川楝子毒性的記載首見于《名醫(yī)別錄》。為進(jìn)一步明確川楝子的肝毒性特點，本實驗就小鼠單次灌服川楝子后肝毒性的時效

3、與量效關(guān)系進(jìn)行了初步研究。1材料與儀器1.1動物KM小鼠，清潔級，18～20g，雌雄各半，上海斯萊克實驗動物有限公司提供，合格證號SCXK(滬)2003－0003。飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心。1.2藥物川楝子原藥材購于上海養(yǎng)和堂張江分店，四川產(chǎn)，批號051216，經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院趙志禮教授鑒定系為楝科植物川楝MeliatoosendanSieb.etZucc.的干燥成熟果實。川楝子藥液的制備（水提醇沉）：將藥物粉碎呈顆粒狀，水煎3次。合并3次藥液，過濾，濃縮，加乙醇，回收乙醇。將上述水提醇沉液濃縮

4、至濃度為10g/ml，置冰箱，保存?zhèn)溆谩ＥR用前，用蒸餾水分別配成所需濃度的藥液（以下簡稱“川楝子”）。1.3試劑丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）試劑（批號060339）；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑（批號051210，均由上海豐匯醫(yī)學(xué)科技有限公司提供）。1.4儀器AR2130電子天平（奧豪斯國際貿(mào)易上海有限公司）；全自動生化分析儀HITACHI7020（日本HITACHI公司）；系統(tǒng)顯微鏡BX51/BX52（日本奧林巴斯光學(xué)株式會社）；全能型脫水機(jī)（徠卡公司）。2方法2.1口服半數(shù)致死量(LD50)測定取小鼠，雌

5、雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。在168～232g/kg之間按照等比級數(shù)(0.9)確定4個給藥劑量。各給藥組按0.4ml/10g灌胃1次，正常組同時灌服等容量蒸餾水。連續(xù)觀察7d。觀察并記錄給藥后的一般狀況和死亡情況；死亡小鼠解剖后肉眼觀察各臟器有無異常變化。2.2口服“毒性時效”關(guān)系研究取小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為8組，按處理時間點依次為0（即正常組），1，2，6，12，24，48，72h組。按0.4ml/10g灌胃1次，0h組小鼠灌服蒸餾水，其余各組灌服188g/kg川楝子。于相應(yīng)時間點稱量小鼠體重，摘眼球

6、取血，血3000r/min離心10min，取血清，以全自動生化分析儀測定血清ALT，AST。摘取小鼠肝臟、脾臟、胸腺，稱重并計算臟器指數(shù)［4］。另取一部分肝組織，常規(guī)HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化。對肝組織形態(tài)進(jìn)行病理分級、積分［1］：肝組織結(jié)構(gòu)正常，無明顯變性、壞死及炎癥細(xì)胞浸潤，0分；肝小葉結(jié)構(gòu)尚正常，可見明顯的混濁腫脹、氣球樣變或脂肪變性，散在點狀壞死(＋)，1分；肝小葉結(jié)構(gòu)不清，可見明顯的灶狀壞死，伴有炎癥細(xì)胞浸潤(＋＋)，2分；肝小葉結(jié)構(gòu)不清、可見明顯的片狀壞死，伴有炎癥細(xì)胞浸潤(+++)

7、，3分；壞死細(xì)胞彌漫性存在于肝小葉中央，層次較多，伴有炎癥細(xì)胞浸潤(++++)，4分。2.3口服“毒性量效”關(guān)系研究取小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，即正常組和川楝子5個劑量組。按0.4ml/10g灌胃1次，正常組灌服蒸餾水，川楝子各劑量組分別灌服166，81，57，40，28g/kg川楝子。1h后，按“2.2”方法測定血清ALT，AST，計算臟器指數(shù)，另取一部分肝組織，用于觀察組織形態(tài)學(xué)變化。2.4統(tǒng)計方法使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件Probit法計算LD50、LD99和LD1。Radit法對肝組織病理積分的數(shù)

8、據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料采用±s表示，使用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理，兩組間比較采用t檢驗法，多組間比較采用單因素方差分析法。P<0.05或P<0.01為差異有顯著性。3結(jié)果3.1口服LD503.1.1給藥后的一般狀況部分動物在給藥后0.5～1h出現(xiàn)腹腔震顫，活動減少，身體略發(fā)涼，氣息微弱。繼而，出現(xiàn)異常反應(yīng)的小鼠部分死亡，死亡時間集中在給藥后的4h內(nèi)。死亡小鼠肝臟肉