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《原發(fā)性肝癌組織中肝素酶表達(dá)與肝癌侵襲 轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究 》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、原發(fā)性肝癌組織中肝素酶表達(dá)與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究羅志強(qiáng)劉鋒邵江華鄔林泉【摘要】目的探討乙酰肝素酶(HeparanaseHpa)在肝癌中的表達(dá)及其與肝癌臨床病理特征的關(guān)系。方法分別采用RT-PCR和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HpamRNA及Hpa蛋白在肝細(xì)胞肝癌、癌旁肝組織及肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)。結(jié)果肝癌HpamRNA和蛋白的表達(dá)顯著高于癌旁及正常肝組織(P0.05),肝癌組織中HpamRNA的表達(dá)與TNM分期、Edmondson分級(jí)和復(fù)發(fā)有關(guān)(P0.05)。結(jié)論HpamRNA及蛋白在肝癌中高表達(dá),并與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、預(yù)后有關(guān)。【關(guān)鍵詞】肝細(xì)胞肝癌乙酰肝素酶侵襲轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)【Abstract】O
2、bjectiveThemainaimofthisinvestigationistoexploretheexpressionofheparanasemRNAandproteininhepatocellularcarcinoma(HCC)anditsrelationshiperasechainreaction(RT-PCR)andimmunohistochemicalstainingRNAandproteininnormalhepatictissues,tumortissuesandadjacenttissuesofhepatocellularcarcinoma.ResultsTheexpr
3、essionofHpamRNAandproteininHCCtissuesalhepatictissues(P0.05).Itondson-Steiner’sclassification(P0.05).ConclusionOverexpressionoftheheparanasemRNAandproteinrelatestotheinvasion,metastasis,recurrenceandprognosisofhepatocellularcarcinoma.【KeyaHeparanaseInvasionMetastasisRecurrence乙酰肝素酶(heparanase,HPA
4、)是1999年克隆分離出的一種葡糖苷酸內(nèi)切酶。它可降解硫酸乙酰肝素(hearansulfate,HS),破壞細(xì)胞外基質(zhì)和血管基底膜,并促進(jìn)腫瘤新生血管生成,使腫瘤細(xì)胞實(shí)現(xiàn)侵襲轉(zhuǎn)移。作者運(yùn)用RT-PCR和免疫組織化學(xué)法對(duì)HpamRNA及Hpa蛋白在肝細(xì)胞肝癌、癌旁肝組織及肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)33例原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)標(biāo)本中HPA的基因表達(dá),并結(jié)合病人的臨床病理學(xué)和隨訪資料,以探討HPA可否作為HCC轉(zhuǎn)移潛能的可靠標(biāo)志。1臨床資料1.1一般資料新鮮冷凍的標(biāo)本取自2005年8月至2006年4月南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院普外科手術(shù)切除并
5、經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)的33例HCC(包括癌和癌旁肝組織)和9例肝臟良性腫瘤(取瘤旁肝組織作正常對(duì)照)。收集病人臨床病理學(xué)檢查資料,HCC組中男28例,女5例;年齡29～73歲,平均49歲。28例術(shù)后6～16個(gè)月內(nèi)獲得隨訪,占85%(28/33)。根據(jù)手術(shù)記錄、術(shù)后病理學(xué)檢查報(bào)告等,將有癌栓、肝內(nèi)播散即衛(wèi)星癌灶和(或)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的14例HCC病人定為高轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)傾向組。反之,無(wú)癌栓、肝內(nèi)衛(wèi)星癌灶和(或)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的19例HCC病人為低轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)傾向組。其中癌灶長(zhǎng)徑≤5cm8例,＞5cm25例;癌灶包膜完整14例、不完整19例;甲胎蛋白(AFP)陽(yáng)性26例、陰性7例;HBsAg陽(yáng)性27例、陰性6例;
6、合并明顯肝硬化18例、無(wú)明顯肝硬化15例;腫瘤EdmondsonⅠ、Ⅱ級(jí)13例、Ⅲ、Ⅳ級(jí)20例;TNMⅠ、Ⅱ期18例、Ⅲ、Ⅳ期15例。隨訪有和無(wú)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)各14例。肝臟良性腫瘤9例中男4例,女5例;年齡32～65歲,平均41歲;其中肝海綿狀血管瘤8例、肝局灶性結(jié)節(jié)性增生1例。1.2總RNA提取和半定量RT-PCR檢測(cè)Trizol總RNA分離試劑盒(Gibco)Trizol一步法提取組織總RNA,甲醛變性膠電泳鑒定及紫外分光光度儀測(cè)定OD值后,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。AMV為T(mén)aKaRa公司產(chǎn)品,dNTP購(gòu)自上海生物工程公司。HPA引物參照文獻(xiàn)〔１〕設(shè)計(jì),由上海生物工程公司合成,上游為5’-2T
7、TCGATCC2CAAGAAGGAATCAAC23’,下游為5-2GATTCAGTTA2CATGGCATCACTAC-3’,其擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為585bp。采用β2actin作為內(nèi)參照,其引物由上海博亞生物公司合成,上游序列為5’2TTCCAGCCTTCCTTCCTGG23’,下游為5’2ATTGCTCCTCCTGAGCGCAA23’,擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為224bp。按50μl反應(yīng)體系行PCR擴(kuò)增。TagTMDNA聚合酶為T(mén)aKaRa產(chǎn)品。H
