煙草浸提液對(duì)大鼠體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的影響

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1、煙草浸提液對(duì)大鼠體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的影響【摘要】目的探索煙草浸提液對(duì)體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的附著和生長(zhǎng)的影響。方法將周齡SD大鼠顱蓋骨,剪成1.5mm×1.5mm大小組織塊,先用0.25%胰蛋白酶消化20min、0.1%Ⅱ型膠原酶消化30min后,再對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),并對(duì)其堿性磷酸酶(ALP)活性及礦化能力進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組按所加煙草浸提液濃度的不同分為0.8、1.6、3.2、6.4、12.5、25和50g/L7個(gè)濃度組,分別測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。采用SPSS13.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)

2、進(jìn)行雙因素方差分析。結(jié)果煙草浸體液對(duì)成骨細(xì)胞的附著和生長(zhǎng)起抑制作用,并隨其濃度的升高而增強(qiáng)。各處理組間存在顯著差異(P<0.01);各組內(nèi)的前3d存在顯著性差異(P<0.01),但3.2~50g/L組第4~7天間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論吸煙不利于口腔種植的臨床愈合。【關(guān)鍵詞】成骨細(xì)胞;原代培養(yǎng);SD大鼠;煙草浸提液【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofsmokelesstobaccoextract(ST)ontheattachmentandgroth

3、ecalvariainratsaged1m×1.5mm.Theyinutesandby0.1%collagenaseIIfor30minutesandthentheliquidsupernatantorphology,histochemicalstainingofalkalinephosphatase(ALPase)andcalcifiednodulesstaining.Theexperimentsentgroups.Theexperimentgroupsokelesstobaccoextract’sconcent

4、ration:0.8,1.6,3.2,6.4,12.5,25and50g/L,thenthecellgroedusingSPSS13.0softentandgroanner.Thedifferenceamongallofgroupsegroupong3.250g/Lgroupsokingisharmfultotheclinichealingoforalimplantoperation.【Keyaryculture,rats,smokelesstobaccoextract目前,口腔種植技術(shù)因其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)而獲得了臨床醫(yī)

5、師及患者的青睞,而骨結(jié)合則是其成功的基礎(chǔ)。骨組織作為一種特殊的鈣化組織,主要由成骨細(xì)胞完成并受體內(nèi)多種因素調(diào)控。隨著細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展,成骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)成為可能。體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞可以排除體內(nèi)多種因素的相互影響,從而為骨形成和代謝機(jī)理方面的研究提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目前成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法主要有2種:酶消化法和組織塊法[1,2]。酶消化法雖可獲得大量細(xì)胞,但獲得的細(xì)胞不純。本實(shí)驗(yàn)擬采用酶消化后再對(duì)組織塊進(jìn)行培養(yǎng)的方法來(lái)獲得純度較高的成骨細(xì)胞,觀察煙草浸提液對(duì)成骨細(xì)胞的附著及生長(zhǎng)的影響,以期證明吸煙是影響口腔種植的

6、不利因素之一。1材料和方法1.1器材和試劑1.1.1主要儀器設(shè)備和材料:超凈工作臺(tái)(蘇州集團(tuán)安泰公司);CO2培養(yǎng)箱(Heraeus);熒光倒置顯微鏡(日本OLYMLOS);眼科手術(shù)器械(上海手術(shù)器械廠);血球計(jì)數(shù)板(鎮(zhèn)江市丹徒科達(dá)醫(yī)療用品廠);50ml玻璃培養(yǎng)瓶(Costar);離心機(jī)(雷動(dòng)爾LDZ52);高糖DMEM(Gibco);胰蛋白酶(Amresco);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所);膠原酶(Invitrogen);煙草(成品盒裝香煙,煙氣煙堿量1.2mg,焦油量13mg);SD大鼠(煙臺(tái)綠葉實(shí)

7、驗(yàn)動(dòng)物中心)。1.1.2主要試劑的配制:①含煙草浸提液培養(yǎng)液的配制[3]:稱取5g成品盒裝香煙的煙絲,加入0.1L的雙蒸水,在37℃孵育箱中浸泡48h,過(guò)濾除菌,將此濃度定為50g/L。用含15ml/L胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液配制含煙草浸提液的培養(yǎng)液,其濃度分別為0.8、1.6、3.2、6.4、12.5、25和50g/L7個(gè)濃度組。②成骨細(xì)胞礦化培養(yǎng)液的配制:DMEM培養(yǎng)基中加入雙抗(含青霉素100U/ml、鏈霉素100U/ml)、10%胎牛血清、Na2CO3。含礦化液的DMEM培養(yǎng)基中加入雙抗(含青霉素100U/m

8、l、鏈霉素100U/ml)、10%胎牛血清、Na2CO3、β甘油磷酸鈉1×10-2mol/L、維生素C50mg/ml、地塞米松1×10-7mol/L。孵育液含3%β甘油磷酸鈉5ml,2%巴比妥鈉5ml,2%硝酸鈣10ml,2%MgSO45ml,蒸餾水25ml。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1大鼠成骨細(xì)胞的原代培養(yǎng):周齡SD大鼠處死后用75%酒精浸泡

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