微生物發(fā)酵對溪黃草抑菌效果的影響

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1、微生物發(fā)酵對溪黃草抑菌效果的影響【關(guān)鍵詞】發(fā)酵；溪黃草；抑菌效果　　溪黃草系唇形科香茶菜屬植物Rabdosiaserra(Maxim.)Hara，由于和中藥大辭典上所收錄的中藥溪黃草的原植物線紋香茶菜Rabdosiastriatus(Benth.)Kodo外形相似而常作溪黃草入藥，而且是廣東藥材市場上中藥溪黃草的主流品種之一，用于清熱利濕、涼血散瘀，治療急性黃疸性肝炎、急性膽囊炎等［1］?！　∧壳瓣P(guān)于溪黃草抑菌效果方面的研究，主要考慮將溪黃草的提取物作為一種健康的食品添加劑。姚勇芳［2］研究了溪黃草中抑菌物質(zhì)的最佳提取條件，并驗證了溪黃草的乙醇提取物對大腸桿菌具有抑制作用，對霉菌抑制

2、效果不明顯；戰(zhàn)宇等［3］研究了溪黃草提取物的抑菌效果；梁盛年等［4］測定了溪黃草乙醇提取物的體外抗菌活性；段志芳等［5］還證實溪黃草水提物對楊桃果實具有一定的保鮮作用?！　“l(fā)酵法一直是中藥炮制方法之一，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，發(fā)酵法應(yīng)用范圍更加廣泛。這種方法借助微生物的作用，改變中藥原有藥性，提高療效，降低毒副作用，擴大適應(yīng)癥［6，7］。本研究以枯草桿菌、乳酸菌和酵母菌為發(fā)酵菌種，研究發(fā)酵后的溪黃草醇提物對細菌和霉菌生長的抑制效果，為高效提取溪黃草抑菌有效成分，大規(guī)模生產(chǎn)高效、低毒、廣譜而經(jīng)濟實用的食品防腐劑、抑菌藥物以及對于循環(huán)利用和處理每年藥廠大量廢棄的藥渣提供了新的途徑和方法?！　?/p>

3、1材料　　溪黃草購自梅州市溫記百草堂，經(jīng)嘉應(yīng)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院廖富林教授鑒定為Rabdosiaserra(Maxim.)Hara。美樂多購自梅州市太平洋商場。干酵母粉,廣東丹寶利酵母有限公司?？莶輻U菌、JY-LZ乳酸芽孢桿菌、大腸桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉、青霉菌保藏于嘉應(yīng)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院實驗室。纖維素酶（綠色木酶），酶活力>15μ/mg，上海伯奧生物科技有限公司?！　?方法　　2.1工藝流程溪黃草→粉碎→稱取5g→加入水或培養(yǎng)基→高壓滅菌(121℃，20min)→按10%接種量接種發(fā)酵菌種→于培養(yǎng)箱中靜止10d→提取→測定抑菌活性?！　?.2發(fā)酵　　2.2.1種子培養(yǎng)基枯草桿菌種

4、子培養(yǎng)基：蛋白胨1%；牛肉膏0.3%；氯化鈉0.15%；pH7.0；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌20min?！　∪樗嵫挎邨U菌培養(yǎng)基：酵母膏1.0％；蛋白胨1.0％；葡萄糖1％；磷酸氫二鉀0.05%；硫酸鎂0.1%；硫酸錳0.05%；pH7.0；121℃濕熱滅菌20min?！　〗湍妇囵B(yǎng)基：去皮馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蒸餾水配制，121℃濕熱滅菌30min。　　2.2.2發(fā)酵培養(yǎng)基枯草桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基：蛋白胨1%；葡萄糖1%；牛肉膏0.3%；氯化鈉0.5%；pH7.0；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌20min。　　乳酸芽孢桿菌培養(yǎng)基：酵母膏1.0％；蛋白胨1.0％；葡萄糖2.5％；磷酸氫

5、二鉀0.05%；硫酸鎂0.1%；硫酸錳0.05%；pH7.0；121℃濕熱滅菌20min?！　∶罉范嗳樗峋囵B(yǎng)基：雀巢脫脂奶粉2%；葡萄糖1%；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌15min。　　酵母菌培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蒸餾水配制，121℃濕熱滅菌30min。　　2.2.3種子培養(yǎng)將活化后的斜面枯草桿菌、乳酸芽孢桿菌分別挑取兩接種環(huán)于相應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，接種后分別置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h?！　?.2.4發(fā)酵培養(yǎng)稱取5g粉碎的溪黃草于100ml的三角瓶內(nèi)，加入30ml蒸餾水，121℃滅菌20min。每瓶加入種子菌液3ml，于適宜的溫度下靜止培養(yǎng)。同時做4種對照，即有5組

6、實驗：Ⅰ：溪黃草+水+菌；Ⅱ：溪黃草+水；Ⅲ：溪黃草+培養(yǎng)基+菌；Ⅳ：溪黃草+培養(yǎng)基；Ⅴ：培養(yǎng)基+菌?！　“l(fā)酵：將枯草桿菌系列，乳酸芽孢桿菌系列，美樂多乳酸菌系列置于(36±1)℃的恒溫培養(yǎng)箱中靜置10d，干酵母菌系列于(28±1)℃的恒溫培養(yǎng)箱中靜置10d?！　?.2.5發(fā)酵前后菌數(shù)量的檢測平板計數(shù)法，3個重復(fù)。　　2.3抑菌物質(zhì)的提取稱取5g的溪黃草置于3角瓶中，加入30ml95%的乙醇，于70℃的恒溫水浴鍋中水浴2h后，濾紙過濾，取濾液，將其于同溫度的水浴鍋中揮干濃縮至稠膏狀，再加入95%的乙醇溶解并定容至10ml。定容后放入冰箱中保藏備用?！　“l(fā)酵后的4個系列4800r/mi

7、n離心20min，固形物按上法處理?！　±w維素酶處理及抑菌物質(zhì)提?。悍謩e稱取纖維素酶0.0108g和0.0310g，加入含5g溪黃草和30ml蒸餾水的三角瓶中，加入后放入55℃的恒溫水浴鍋中，水浴2h后取出，濾紙過濾，濾渣按上法處理?！　?.4抑菌活性的檢測指示菌種活化后用無菌生理鹽水制成106～107cfu/ml菌懸液。　　　　取0.2ml菌懸液涂布于牛肉膏蛋白胨或PDA培養(yǎng)基上，靜置10min?！　〈郎y樣品用無菌毛細吸管吸取管長的1/3后，滴于直徑為5