衣原體病,弓形蟲間接血凝(iha)試驗操作方法

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1、十一、衣原體病間接血凝（IHA）試驗操作方法衣原體屬的三個種都存在共同的屬特異性抗原。衣原體病間接血凝試驗，則是用已知的屬抗原檢測人、畜、禽血清或分泌物中的抗體。具有特異、敏感、簡便、快速之優(yōu)點。（一）試劑盒內(nèi)容包括衣原體屬抗原致敏綿羊紅細胞、陽性和陰性對照血清。（二）試驗方法1．將生理鹽水滴于V型反應板也孔中，每孔50微升。2．取被檢樣品（血清或分泌物）50微升于第1孔中，與生理鹽水混勻后吸50微升加于第2孔，依次作對倍稀釋至所要求的稀釋度。3．每孔加抗原25微升，作定性檢查時只需加兩孔。人血清只加1：4和1：8

2、兩孔。陰道分泌物只加1：2和1：46?？撞溉閯游镅逯患?：32和1：64兩孔，禽類血清只加1：8和1：18兩孔。如作定量試驗則可根據(jù)實際需要自行決定。試驗：設(shè)陽性血清+抗原、陰性血清+抗原、生理鹽水+抗原各1孔。（三）結(jié)果判定1．判定標準“++++”紅細胞全部凝集，形成一層均勻的膜，布滿整個孔底“+++”紅細胞在孔底形成一層薄膜，面積比前者稍小“++”紅細胞在孔底形成薄層凝集，邊緣松散或呈鋸齒狀“+”紅細胞在孔底呈稀薄、、散在、少量凝集，孔底有小圓點“±”紅細胞沉于孔底，但周圍不光滑或中心有空斑“-”紅細胞完全沉

3、于孔底，呈光滑的圓點“++”經(jīng)上的凝集判為陽性凝集2．對照試驗出現(xiàn)如下結(jié)果試驗方可成立，否則應重試，陽性血清+抗原呈“++++”；陰性血清+抗原呈“—”，抗原+生理鹽水呈“—”。3．被檢樣品判定標準：人群血清效價≥1：8（++）者判為陽性；效價≤1：2者判為陰性；介于二者之間判為可疑。人群陰道分泌效價≥1：2（++）者判為陽性；效價≤1：2（++）者判為陰性。哺乳動物血清效價≥1：64（++）者判為陽性；效價≤1：16（++）者判為陰性；介于二者之間判為可疑。禽類血清效價≥1：16（++）者判為陽性；效價≤1：4（

4、++）者判為陰性；介于二者之間判為可疑。[注]被檢樣品采集及處理方法：1.血清：按常規(guī)方法采血及分離血清，要求無腐敗。2.陰道分泌物：用滅菌棉拭子插入陰道3厘米，蘸取分泌物，浸入1毫升生理鹽水中，擠壓后取液體，經(jīng)20000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，取上清液作待檢樣品。(邱昌慶)十二、弓形體間接血凝集試驗（IHA）操作方法本細試驗系用弓形體間接紅細胞凝集試驗凍干抗原（IHA抗原），檢測人和動物血清中弓形體（蟲）抗體的方法。檢測在96（12×8）孔110°V型有機玻璃（聚苯乙烯）微型反應板上進行。（一）操作方法1．將IHA抗

5、原按瓶簽所標毫升數(shù)用滅菌蒸鎦水稀釋搖勻，1500~2000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘，棄上清液，加等量稀釋液搖勻，置4℃左右24小時后使用。稀釋后診斷液，10天內(nèi)效價不變。2．被檢血清（以下稱樣品）的采取采欲測弓形蟲抗體的人或動物血液2~2.5毫升，大約能分離1毫升左右血清（應無血球）。3．加稀釋液每孔加0.075毫升，如果沒有取液器（移液器），可以把磨鈍（齊）了的12號針頭接在鹽水接頭（針頭接嘴）上，后裝一橡皮乳頭，組成移液管，將移液管豎直加三滴，每一滴約0.025毫升（每毫升約40滴，下同）。定性檢查時，每個樣品

6、加4孔，定量檢查加8孔，一塊反應板上定性能檢20個樣品，定量能檢10個樣品。每塊板上不論檢測幾個樣品，均應設(shè)陽、陰性血清對照，對照均加8孔。4．加樣品、陽、陰性對照血清第一孔加相應血清0.025毫升。5．稀釋定性檢查時，稀釋至第3孔，定量和對照至第8孔，為稀釋液對照至第7孔。定性的第4孔，定量和對照的第8孔，為稀釋液對照；按常規(guī)用取液器稀釋，如無取液器，可用0.025毫升的稀釋棒稀釋。將稀釋棒放入第1孔內(nèi)，用左手掌、右手背夾住稀釋棒，左右往復搓動，使棒旋轉(zhuǎn)30次以上，然后將棒夾緊、夾平提起，移入相應的第2孔內(nèi)，如法

7、依次往下稀釋，至應稀釋的最后一孔，將棒取出。棒上帶走0.025毫升液體。每個孔內(nèi)的液體仍為0.075毫升，移棒時切莫使棒相互接觸，旋轉(zhuǎn)時不要讓棒上下?lián)v，否則容易產(chǎn)生氣泡。各孔的稀釋度分別為孔號12345678稀釋度（1：）41664265或稀釋液對照1024409616384稀釋液對照6．加診斷液（IHA抗原）將診斷液搖勻，每孔加0.025毫升。用移液管加，每孔一滴，加完后將反應板置微型振蕩器上振蕩1~2分鐘，直至診斷液中的血球分布均勻、從振蕩器上取下反應板，蓋上一塊與反應板大小相近的玻璃片或干凈的紙，以防灰塵落入

8、，置22~37℃下2~3小時后觀察結(jié)果。（一）結(jié)果判定在陽性對照血清滴度不低于1：1024（第5孔），陰性對照血清除第1孔允許存在前滯現(xiàn)象（+）外，其余各孔均為（—），稀釋液對照為（—）的前提下，對被檢血清進行判定，否則應檢查：①操作是否正確無誤；②反應板、稀釋棒等是否洗滌干凈；③稀釋液、診斷液、對照血清是否有效；④其它原因。(蘭州獸醫(yī)研究所)